194903. lajstromszámú szabadalom • Eljárás tilozin előállítására
194903 1 A találmány tilozin tisztítási eljárásra vonatkozik polimer gyantán történő -szelektív adszorpció útján. A tudományos és szabadalmi szakirodalpii helyek (3 178 341 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás, 901 273 sz. nagy-britanniai szabadalmi leírás) olyan tilozin-bázis extrahálásról számolnak be, melynek során a íermentlé pH-értékét 8,5- re állítják, majd klórozott szerves oldószerekkel így diklór-metánnal vagy kloroformmal, vagy nem klórozott oldószerekkel így metil-izobutil-ketonnal extrahálnak. Az egyesített szerves extraktumokat a továbbiakban csökkentett nyomáson koncentrálják és aktív szénnel történő derítés után n-hexán adagolásával a tilozin-bázist kicsapják. Más eljárás szerint a tilozin-bázist a szerves extraktumból vizes fázisba vezetjük valamely oldható sója formájában, mely sót valamely alkalmas szerves vagy szervetlen savval (borkősavval vagy foszforsavval) történő neutralizálással állítják elő. A tilozint oldható sója formájában tartalmazó vizes oldatot csökkentett nyomáson szárítva a felhasznált savnak megfelelő sója formájában kapják az antibiotikumot. A fentiek szerint eljárva a szennyeződések teljes mértékben nem távolíthatók el és ez néhány esetben, különösen nagy mennyiségű fermentleveknél hátrányos, így a végtermék minősége ezeknek a szennyeződéseknek típusától függ (színezék szennyeződés, vagy fermentációs melléktermék). A szennyeződések a kitermelést rontják és károsan befolyásolják az analitikai és organoleptikus tulajdonságokat. A találmány tárgya a fenti hátrányok kiküszöbölése révén tilozin tisztításra vonatkozó új eljárás kidolgozása, mely könnyen megvalósítható, és az igényeknek megfelelő terméket eredményez. A találmány szerinti tisztítási eljárás során a fermentléből a tilozint szelektíven adszorbeáltatjuk valamely adszorbens gyantán — ER-180<R) (Rohm and Haas) — vagy valamely más típusú polimer gyantán, így Ämberlite-n (XAD2; XAD4 — Rohm and Haas), Daion(R) típuson (HP 20, HP 21, HP 30, HP 40, HP 50 — Mitsubishi, Doulite típuson (S 861, S 862, S 863, S 866 — Diamond Shamrock), Kastel<R) típuson (S 112 — Montedison), Lewatite<R) típuson (OC 1031 — Bayer A.G.). A szakember számára nyilvánvaló, hogy a találmány szerinti tisztítási eljárást elsősorban az adszorbció körülményei, a deszorbciós művelet során használt megfelelő oldószerek vagy azok keverékei, a megfelelő pH-tartomány, határozzák meg oly módon, hogy az azt követő műveletek az igényeknek megfelelő végterméket eredményezzenek. A találmány szerinti új tisztítási eljárás során, melyet a leírásban és a példákban ismertetünk, a fermentációs levet szűrjük, a tilozint tartalmazó szurlet pH-értékét vizes nátrium-hidroxid oldat adagolásával 7,5 — 10 ér- 2 2 tékre állítjuk, majd polimer gyantán adszorbeáltatjuk. A fenti pH-értékeken a fermenilében lévő színező szennyezések jelentős része a gyantán átfolyó folyadékkal távozik, míg a tilozin-bázis a gyantán adszorbeálódik. A találmány szerinti tisztítási eljárás egy másik igen jelentős előnye, hogy az alkalmazott gyanta a kinyerendő termékhez nagyon magas adszorbciós kapacitással rendelkezik. (40—50 g/1) és a gyantát egy következő reakcióra víz/alkohol vagy víz/aceton oldószerrendszerrel végrehajtott deszorbciós művelet után ismét felhasználhatjuk. __ A fermentlében jelenlévő szennyeződés típusától függően a gyantát 20—30 műveleti ciklusban alkalmazhatjuk és csak ezután szükséges a gyanta regenerálása, mely könnyen végrehajtható vízrízopropil-alkohol (70:30) arányú eleggyel és 4% nátrium-hidroxiddal történő kezelés útján. A tilozin-bázis deszorbciója a gyantáról a fentiek szerint valósítható meg oly módon, hogy előnyösen vízúzopropil-alkohol vagy víz:aceton 1:1 térfogatarányú elegyét alkalmazzuk. A fentiek szerinti eljárással kapott eluátumot valamely makro-retikuláris gyenge anioncserélő gyantán — IRA 35(R> (Rohm and Haas) — a teljes elszíntelenedés eléréséig adszorbeáltatjuk. A találmány szerinti eljárás során más típusú gyantákat, így Lewatite<R) típust (CA 9 222— Bayer) vagy Kastel<RI (A-105—Montedison) típust is használhatunk. Csökkentett nyomáson történő bepárlás után a pH-t a megfelelő értékre állítjuk, és az eluátumból kisózással a tilozin-bázist kicsapjuk és ily módon 80%-os kitermelést érünk el. A fentiek szerint tisztított tilozin-bázisból sztöchiometrikus mennyiségű savval történő kezeléssel vizes-alkoholos közegben sót (tartarátot, foszfátot) képezhetünk és a szenes szűrés után kapott színtelen oldatból a sót ismert módon, előnyösen az oldat szárazra párolásával vagy porlasztva szárításával elkülönítjük. Egy másik eljárási változat szerint a fenti sókat a tisztított eluátumból történő közvetlen sóképzéssel is előállíthatjuk oly módon, hogy a művelet végén csökkentett nyomáson az oldatot szárazra pároljuk, vagy a sót más ismert módon elkülönítjük. A találmány szerinti eljárást az alábbi példákon mutatjuk be. 1. példa A tilozin bázis tisztítása 440 kg fermentléhez 3% dicalite-t adunk és dobszürön szűrjük. A kapott 615 liter térfogatú szürletet — melyben az aktivitás a kiindu lásinak 94%-a —20%-os nátrium-hídroxiddal kezelve pH=7,5 értékre állítjuk és ER- 180R (gyantán (Rohm and Haas) adszorbeáltatjuk 150 (liter) óra átfolyási sebességgel (100 liter térfogatú gyanta; kolonna átmérő: 22,5 cm). Az ily módon kezelt fermentlé aktivitást nem mutat. A kolonnát ezután 150 liter/óra átfolyá-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
