194832. lajstromszámú szabadalom • Eljárás fenil-kinolin-karbonsavak és az ezeket tartalmazó gyógyászerkészítmények előállítására
194832 Lim főid leukémia L1210 A vizsgálatokban CD2F1 egereket használtunk, mindegyik hímnemű volt, legalább 18 g tömegű és a vizsgálat kezdetekor a tömegük közötti eltérés 4 g-nál kevesebb volt. A vizsgálati csoport 6 egeret tartalmazott. A vizsgálati egerek mindegyikébe tumort implantáltunk oly mádon, hogy 0,1 ml ascitikus folyadékot, mely 105, L1210 leukémiában szenvedő egérből származó sejtet tartalmazott, adtunk nekik intraperltoneális injekció formájában. A vizsgált vegyületeket hidroxi-propil-cellulózban vagy sós vízben szuszpendáltuk és Tween 80 felületaktív anyagot adtunk hozzá vagy csak sós vízben oldottuk, majd különböző dózisokban Intraperitoneállsan adagoltuk őket az egereknek naponta egyszer 9 egymást követő napon. A tumor inokulálás napját 0. napnak tekintettük. A kontroll egerek csak sós víz vagy hidroxi-propil-cellulóz hordozóanyag injekciót kaptak. Az egerek tömegét folyamatosan mértük, és az egerek óletbenmaradását a szokásos módon 30 napon keresztül rögzítettük. A közepes túlélési időket és a kezelt (T) és a kontroll (C) egerek közepes túlélési Idejének arányát kiszámítottuk. A kezeletlen tumorral inokulált egerek közepes túlélési ideje 8-9 nap volt. A használt vegyület hatékonyságát a túlélési idők alapján becsültük meg. Az eredményeket a kontroll egerek túlélési Idejének %-ában fejeztük ki (túlélési Idő = T/C. 100%). A hatékonysági kritériumot a következőképpen állapítottuk meg: T/C. 100 >125%. A találmány szerinti vegyületekkel végzett vizsgálatok eredményeit a 6. táblázat tartalmazza. Az adatok azt mutatják, hogy a találmány szerinti vegyületek hatékonyak egerek L1210 leukémiája ellen. Emberi vastagbél tumor elleni in vitro vizsgálat A találmány szerinti vegyületeket abból a szempontból is megvizsgáltuk, hogy mennyire képesek meggátolni az emberi vastagbél karcinomás sejtjeinek növekedését in vitro. Azok a vegyületek, amelyek hatékonyak ezeknek a sejteknek a növekedésének a meggátlására, az 19 L1210 leukémiában szenvedő egerek sejtburjánzásának megakadályozására is aktivitást mutattak. Az emberi vastagbél sejteket, amelyeket 5 HOT-15-nek neveztünk, egy sebészeti beavatkozás során eltávolított vastagbél adenokarcinoma mintából vettük. A sejteket Roswell Park Medical Institute (RPMI) közegben, melyhez 10% hővel Inokulált magzati borjúszórumot, 100 10 egység/ml penicillint, 100 |xg/ml sztreptomicint, 20 n.g/ml gentamicint, 25 ^g/ml funglzont, 0.075% nátrium-hldrogén-karbonátot, 10 ^mól 4 -(2—hldroxletll)—1 -piperazln-etán-szulfonsavat és 10 jjimól N—trlsz(hidroxl—metll)—metil-gll- 15 cint adtunk, tenyésztettünk. Annak érdekében, hogy a vizsgált vegyületeknek a sejtek növekedésének gátlására való hatékonyságát megvizsgáljuk, a következő eljárást követtük: a 0. napon 35 ml-es edényekben lévő szövet- 20 kultúrákat 2 ml fenti kiegészített RPM11640 közegben oldott 1,5 x 1 ty HCTI5 sejttel oltottunk be. Az első napon a mintát tartalmazó edényekből a sejteket trlpszlnes (0,25%) kezeléssel gyűjtöttük össze és hemocltomóterrel számláltuk 25 meg az egyes edényekben lévő sejtek számát. A találmány szerinti vegyületeket különböző koncentrációban adtuk más kultúrákhoz. A 4. napon a kezeletlen és a kontroll kultúrákat tripszines kezeléssel gyűjtöttük össze és méghatá- 30 roztuk a kultúrákban lévő sejtek számát. A kontroll sejtek megduplázódásának számát az 1 és 4. napon mórt sejtek számából határoztuk meg. Az IDso-et, vagyis azt a hatóanyagkoncentrációt, amely ahhoz szükséges, hogy a meg- 35 duplázódások számát 50%-kal csökkentse, a dózis-válasz görbéből számítottuk kl. A dózisválasz görbét úgy rajzoltuk meg, hogy logaritmus papíron ábrázoltuk a vegyület koncentrációkat mikrogramm/ml egységben a sejtek szá- 40 mának függvényében. A találmány szerinti vegyületeket és a klinlkallag alkalmazott referencia vegyületekkel végzett vizsgálat eredményeit a 6. táblázat tartalmazza. A táblázat szerint a vegyületek alkalmasak az emberi vastag- 45 bél rákos sejtjeinek növekedésének meggátlására. 20 6. táblázat Példa száma L1210 leukémia dózis (mg/kg) T/C % in vitro HCTID50 M.g/ml 1. (200)189 0,05 2. (50)186 0,10 3. (400) 207 0,50 4. (200) 128 0,48 5. (400)141 0,02 6. (400)162 0,24 7. (200)136 2,30 8. (400) 147 0,40 9. (200) 127 0,07 10. (200)163 0,03 11. (25)176 0,19 12. (50) 261 1,00 13. (400) 129 0,24 14. (50)195 0,38 12
