194741. lajstromszámú szabadalom • Eljárás NMR felvételhez használható kontrasztanyagok előállítására
9 194 741 10 I. táblázat DAGANATOK RELAXÁCIÓS SEBESSÉGE EMT6 daganat a Balb/c egér horpaszában (10 napos daganati növekedés) Vezikulába ágyazott kontrasztanyag A megadott értékek: T, (ms-ban) + standard deviáció n = egerek száma Rendszer* Injektálás utáni idő (óra) Megjegyz. 1-2 2-5 5-8 24 PBS kontroll 962± 24 974±50 920+19 926 Tfr!jes atlag n = 9 n = 11 n = 4 960±41 n = 25 DPPC/CHOL 2:1 869± 28 840+30 845+ 40 Gd/DTPA 200 mM n = 14 n = 13 n = 13 DSPC/CHOL 2:1 812+45 768+30 769+28 Gd/DTPA 200 mM n = 8 n = 8 n = 4 DSPC/CHOL 1:1 710+19 720+21665+28 Gd/DTPA 200 mM n = 2 n = 3 n = 4 *Injektálási térfogat = 250-300 ml A lipidkoncentráció általában 20 mg/ml II. táblázat MÁJAK RELAXÁCIÓS SEBESSÉGE Daganatos Balb/c egér Kontrasztanyag injektálás után Vezikulába zárt NMR kontrasztanyag A megadott értékek: T, (ms-ban) + standard deviáció n = az egerek száma Rendszer* Injektálás utáni idő (óra) Megjegyz. 1-2 2-5 5-8 24 PBS kontroll 400+39 380+26 411+6 412 n = 8 n = 12 n = 3 n = 1 DPPC/CHOL 2:1 379+35 377+29 375+34 Gd/DTPA 200 mM n = 11 n = 11 n = 11 DSPC/CHOL 2:1 349+17 345+13 379+29 Gd/DTPA 200 mM n = 11 n = 11 n = 7 DSPC/CHOL 1:1 330+32 342+11370+13 Gd/DTPA n = 2 n = 3 n = 4 Teljes átlag injektálási térfogat = 250-300 ml A lipidkoncentráció általában 20 mg/ml Az NMR felvételi technika számára akkor igazán hasznos egy kontrasztanyag, ha minimális toxicitás mellett maximálisan növeli l/T,-et és specifikus a vizsgálni kívánt szövettípusra. Jelen találmány anyagai kielégítik ezen követelményeket. Makromolekuláris sokaság növelheti az egységnyi ion okozta relaxációs ha- 5 tást, ahogyan a poli-lizin Gd/DTPA oldatok 1/T, és 1/ T2 értékeire gyakorolt hatása demonstrálta (lásd 5. ábra). Az alacsony toxicitást úgy értük el, hogy a közönséges körülmények között toxikus paramágneses iont egy erős keláttal asszociáltuk a makromolekulás soka- 10 ságba (zárványosítás vezikulába), mely esetben al ig kerül ion a vérkeringésbe. Az NMR relaxáció tovább növel: szik azáltal, hogy a vezikula maximálja a víz protonjainak az ionhoz való hozzáférhetőségét. Ez a hatás, mint a zárványosított Gd/DTPA erős relaxációs hatása 15 mutatja (lásd a 2. ábra), kísérleteinkben bekövetkezett. A szövetspecifitást a micelluláris sokaság komplex természete biztosítja, minthogy a biológiai alakfelismerési folyamatok a makromolekulát meghatározott helyekre „vezetik”. Jól demonstrálja ezt a foszfolipid ve- 20 zikuláknak a szöveti relaxációs sebességekre gyakorolt eltérő hatása (lásd 4. ábra, valamint I. és H. táblázat), továbbá a vezikulákba ágyazott Gd/DTPA-nak a daganat! relaxációra gyakorolt specifikus hatása, összevetve a közel azonos, teljes koncentrációjú oldott szabad 25 Gd/DTPA hatásával (lásd 4. és 6. ábra). Fentiekben leírtuk, hogy az antitesteknek vezikulákhoz kötődése szövetspecifitást eredményez (lásd Martin és munkatársai „Liposzómák sejtekhez való immunspecifikus kötődése” című cikkét, Biochemistry, 30 1981, 20, 4229-4238. oldal), melynek közlése, speciálisan, a fenti referenciában foglaltatik. Az antimiozin kimetszett szívizom NMR-felvételéhez potenciális jelölt. Az antifibrin előállítását a közelmúltban publikálták (lásd Hűi és munkatársai „Monoklonális antitestecskék 35 szintetikus fibrinszerű peptidek emberi fibrinhez és nem fibrinogénhez való kötésére” című cikkét, Science, l'!83, 222, 1129-1131. oldal). Ez az antitest várhatóan a vérrögök azon helyein koncentrálódik, ahol a fibrin képződik. Az antifibrinhez kapcsolódó reagens- 40 hordozók a véredényekben lévő rögök és trombusok NMR-felvételéhez szolgálhatnak kontrasztanyagként. Mindazonáltal vannak más felületi mechanizmusok is, melyek a sejtfelismerést segítik, és arról ismertek, hogy a vezikulák bioeloszlását módosítják. Például a hólya- 45 gocskák felületéhez kötődő szénhidrát receptor analógokról kimutatták, hogy kiválasztják a vezikulákat (lásd Mauk és munkatársai „Lipid vezikulák kiválasztása: Szénhidrát receptor analógok egérleukocitákhoz való specifitása” című cikkét. Proc. Natl. Acad. Sei., USA, 50 1980, 77, 4430-4434. oldal; Mauk és munkatársai „Vezikula kiválasztás: Egérleukociták felszabadulási ideje bőr ala adott injekciók hatására” című cikkét, Science, 1980, 207, 309-311. oldal). Az ilyen felületmódosító anyagok általi kiválasztás közvetlenül alkalmazható a 55 paramágneses ion bioeloszlásának módosítására. Szabadalmi igénypontok 1. Paramágneses anyagokat tartalmazó mágneses 60 magrezonancia kontrasztanyagok, melyekben a paramágneses anyag adott esetben egy kelátképző szerrel van asszociálva, azzal jellemezve, hogy 50 pmól/1 és 1 mól/1 közötti koncentrációban paramágneses anyagként átmeneti fémek, aktinidák és lantanidák 65 sói, így Gd(III), Mn(II), Cu(II), Cr(III), Fe(II), Fe(III), 6
