194565. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 9-(1,3-dihidroxi-2-propoximetil)-guanin gyűrűs foszfát-észtersói és ilyen vegyületeket tartalmazó vírusellenes készítmények előállítására
1 194 565 2 4. példa Az (I) általános képletíi vegyületek kivételes vírusellenes hatását az alábbiakban ismertetett vizsgálattal mutatjuk be. HEp-2 sejttenyészetekben állítjuk elő a megfertőzésre szolgáló herpesz szimplex 2 vírus G törzset. A vírus adszorbeálását 1 órán át végezzük, majd friss táptalajt helyezünk a sejtekre, és ezeket addig inkubáljuk 35 C- on, amíg az összes sejt meg nem fertőződik. A sejtszuszpcnziól —70 °C-on megfagyasztjuk, hagyjuk, hogy felengedjen, és centrifugálással eltávolítjuk a sejttörmeléket. A felülúszó folyadékot alíkvot részekre osztjuk, és felhasználásig —70 °C-on megfagyasztva tároljuk. A felülúszó folyadék 106'7-szeres hígítása megfertőzi a sejttenyészet 50 %-át HLsp-2 sejtek esetén (CCIDS0). E folyadék 103,7-szeres hígítása az egerek 50 %-át elpusztítja (LCso)-20-20 darab, 15—17 g testsúlyű svájci Webster nőstény egérből álló csoportokat megfertőzünk 0,2 ml EMEM intraperitoneális beadásával. Ez a folyadékmenynyiség annyi vírust tartalmaz, hogy egy-egy egér az LC50- érték 10-szeresét kapja. Az LD50-érték 10-szercsénél 100,5-del több vagy kevesebb vírussal megfertőzött ege-Táblázat W, Wa jelentése az Dózis, Túlélő egerek száma Átlagos lúl(1) általános ' mg/kg összes egér száma clcsi idő, képletben nap Kontroll — 0/28 9,1±1,7 W = H O 20* 13/20 11,4±2,3 Wa = (HO)P-10 8/20 11,6+2,7 OH 5 5/20 11,5±2,8 W = Wa = 2(1* 6/20 14,015.1 O II (HO)P-10 4/20 12,8±4,8 OH 5 8/20 14,2+5,8 W + Wa = 20* 10/20 16.3±5,0 O II 10 ’ 3/20 12,2±4,7 (HO)P = gyűrűs 5 8/20 14,7±5,5 * LDS0 nagyobb, mint 20 mg/kg. rek a vírulencia ellenőrzésére szolgálnak, hogy meggyőződjünk arról, hogy az alkalmazott modell megfelelő. A megfertőzést követően 6 óra múlva kezdjük el a kezelést a vizsgált vegyülctekkel. Az egyes egércsopor- 5 toknak 5 mg/kg, 10 mg/kg, illetve 20 mg/kg dózisban adjuk be a vegyületeket orálisan. A szintén 20 egérből álló kontroll csoportnak fiziológiás sóoldatot adunk be orálisan. A kezelést 24 órával a megfertőzés után megismételjük. IQ A fentebb ismerteiéit vizsgálat során az (I) általános képletei vegyületek vírusellenes hatást mutatnak. A kapott adatokat az alábbi táblázat tartalmazza. Szabadalmi igénypontok 15 1. Eljárás az (1) általános képletíi 9-(l ,3-dihidroxi-2- -propoximeti!)-guanin gyűrűs foszfátésztersók — ebben a képletben B valamely gyógyászati szempontból elfogadható sót képző iont, előnyösen alkálifém- vagy 20 am móniumiont képvisel — el őállítására, azzal jellemezve, hogy a) valamely (Xb) általános képlett! vcgyülctct ahol Y valamely lipolll aminocsoportot képvisel — kondenzálószerrel reagáltatunk, majd a kapott terméket a B iont, 25 előnyösen alkálifém- vagy ammóniumiont tartalmazó puffer jelenlétében kromatográfiai tisztításnak vetjük alá; vagy b) a (X) képletíi 9-(l ,3-dihidroxi-2-propoximetil)-guanint foszforilezőszerrel reagáltatjuk, majd a kapott 20 terméket a B iont, előnyösen alkálifém- vagy ammóniumiont tartalmazó erős bázissal hidrolizáljuk. 2. Az 1. igénypont szerinti a) eljárás, azzal jellemezve, hegy kondenzálószerként dicildohexil-karbodiimidet alkalmazunk. 25 3. Az I. igénypont szerinti b) eljárás, azzal jellemezve, hegy foszförilezőszeiként piroloszloril-kloridot alkalmazunk. 4. Eljárás különösen vírusellenes hatású gyógyszerkészítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy vala-40 mely, az 1. igénypont szerint előállított (1) általános képlet vegyületet — ahol B az 1. igénypontban megadott jelentésű — gyógyászati szempontból elfogadható vivőanyaggal és/vagy egyéb gyógyszerészeti segédanyaggal összekeverve gyógyászati készítménnyé alakítunk. 45 4 db ábra
