194496. lajstromszámú szabadalom • Eljárás Marek-kór elleni élő vakcina előállítására
1 194 496 2 A Marek-kór a csirkék rosszindulatú nyiroksejtburjánzási (limfo-proliferatív) betegsége, amelyet egy herpeszvírus, a Marek-kór vírus okoz. Ezt 1907-ben ismerték fel először, ez még ma is a legpusztítóbb a baromfivírusok között. A találmány egy nagyon immunogén és nem patogén víruskészítménnyel foglalkozik, ez a vírus az 1. szerotípusú madársejttenyészeteken végzett sorozatos passzálásokkal és tarfolt (plakk) tisztítással készül. A jelen víruskészítmény előnyösen egy nagyon immunogén és nem patogén MDV-klónból áll, amely klón a CVI-988 jelű MDV-törzsből származik. Az eredeti vírusizolátumot, vagyis a CVI-988 MDV-szülőtörzset, egy egészséges laboratóriumi csirkéből nyerték, mint olyan kis virulenciájú izolátumot, amelyet sejttenyészeteken végzett sorozatos passzálásokkal gyengíteni lehet [Rispens és munkatársai: Avian Diseases 16, 108-125 és 126-138 (1972)1 Azóta a madársejttenyészetben mintegy 35 passzálás után nyert víruskészítményt sikeresen alkalmazzák csirkék vakcinálására Marek-kór (MD) ellen. Kezdetben a vírus gyengítését kacsaembrió-fibroblaszt (DEF) tenyészetben hajtották végre. A kacsákat azonban nehéz speciális, patogénmentes (SPF) körülmények között tartani. Ez szükségessé teszi mindegyik termelési tétel kiterjedt vizsgálatát abból a célból, hogy a madarakra patogén mikroorganizmusok távolléte garantált legyen. Csirkék tartása SPF-körülmények között kevesebb problémát jelent. Ezen felül a csirkesejtek előnyösek, mivel nem visznek be az MD-vakcinákba az állatfajra idegen sejteket. Következéskép en az 1967-1978 közti időszakban a CVI-988 MDV-törzset csirkeembrió fibroblaszt sejttenyészethez (CEF) adaptálták, és a CVI-988 MDV-vakcina előállítói átálltak CEF-ben végzett vakcina-előállításra. Bár a CVI-988 MDV szülőtörzsre alapuló vakcinák a gyakorlatban nagyon kielégítő eredményeket nyújtanak [Maas és munkatársai: World Poultry Sei., 38, 163-176 (1982)], ezek MD-károsodásokat válthatnak ki az MD-re nagyon fogékony SPF Rhode Island Red (RIR) csirkékben, amikor ezeket a csirkéket a normális szabadtéri dózis tízszeresével inokuláljuk [Avian Phathology, 6, 395-403 (1977)]. A Marek-kór elleni, használatban levő egyéb vakcinák a következők: A) Pulyka herpeszvíruson (Turkey Herpesvirus, HVT FC 126) alapuló vakcina [Avian Diseases 14, 413-429 (1970) és 3642574 lajstromszámú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás], amely vírus 3. szerotípusú madár-herpeszvírusok (Avian Herpesvirus) közé tartozik. Ennek a vakcinának a sejtmentes formáját a 3783098 lajstromszámú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás hja le. B) Egy virulens MDV-törzs (HPRS-16) gyengítésével nyert vakcina [journal of General Virology, 4, 557-564 (1969), és 3674861 lajstromszámú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás], amely törzs az 1. szerotípusú madár-herpeszvírusok közé tartozik. C) Egy 2. szerotípusú Marek-kór vírusnak (SB-1) nem onkogén vírustörzsén alapuló vakcina [Journal National Cancer Institute, 60, 1075-1082 (1978) és 4160024 lajstromszámú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírási Ezt az vakcinát hatásosan alkalmazzák általában HVT-vakcinákkal képzett keverékként. A jelen találmány szerint víruskészítményt, előnyösen vakcinát szolgáltatunk, amely nagymértékben immunogén és nem patogén baromfiakban, külünösen csirkékben. A jelen találmány szerinti víruskészítmény az 1. szerotípusú madár-herpeszvírusok közé tartozó élő MDV-klónt tartalmaz, amely klón képes az említett készítménnyel inokulált csirkéket megvédeni a Marekkór (MD) vírusok virulens és nagyon virulens biológiai variánsainak ismételt fertőzései ellen. A találmány szerinti víruskészítmény előnyösen olyan kiónt tartalmaz, amelyet a CVI-988 MDV-vírusizolátumból nyerünk DEF-ben végzett sorozatos passzálással és hat tarfolttisztítási lépéssel a 39. és 49. DEF-passzálás között. Ezt a vírusklónt, amelyet CVI-988 MDV „C” kiónnak nevezünk, nagy mértékű immunogén tulajdonságai miatt választottuk ki, és a miatt, mert nem patogén RIR csirkékre. Tekintettel ennek alkalmazására oltóvírusként vakcinatermelésben, a szóban forgó vírust CEF-hez adaptáltuk váltakozó víruspasszálás segítségével, CEF-ben és DEF-ben az 52. és 63. sejttenyészet-passzálások között. Ezt a kiónt, a 65. CEF-passzálásban (CVI-988, MDV CEF65 ,,C”-klón) 1984. március 28-án letétbe helyeztük PC PV 1 számon a Phabagen Collectionnál (Vakgroep Moléculaire Biologie, Transitorium 3, Padualaan, 8, 3584 CH, Utrecht, Hollandia). Ezenkívül deponáltuk a törzset 1-426 számon a Collection Nationale de Cultures de Microorganismes gyűjteménynél is (Institut Pasteur, 28, Rue du Docteur Roux, 75015, Párizs, Franciaország). Ezen túl a találmány tárgyát képezi egy eljárás víruskészítmény, elsősorban vakcina, előállítására Marekkór ellen, amely készítményre az jellemző, hogy az 1. szerotípusú madár-herpeszvírusok közé tartozó Marek-kór vírusnak egy élő vírusklónját használja fel, amely klón képes az említett klónnal inokulált csirkék megvédésére a Marek-kór (MD) vírusok virulens és nagyon virulens biológiai variánsainak ismételt fertőzései ellen. A jelen találmány szerinti ilyen kiónt úgy nyerünk, hogy az 1. szerotípusú madár-herpeszvírusok közé tartozó Marek-kór vírusokat sorozatosan passzálunk madár-sejttenyészetben és tarfolt-tisztítást végzünk, ezáltal a kiónt immunogén és nem patogén tulajdonságai alapján választjuk ki, a nem patogén tulajdonságot elsősorban a nagy mértékben MD-érzékeny RIR csirkékre értve. A kiindulási anyagként használt Marek-kór vírus előnyösen a CVI-988 MDV-vírus. Előnyös kiónt nyerünk a CVI-988 MDV vírusizolátum sorozatos passzálásával kacsaembrió-fibroblasztban (DEF) és hat tarfolttisztítási lépéssel a 39. és 49. DEF-passzálás között. Amint fentebb megállapítottuk, ezt a kiónt, amelyet CVI-988 MDV „C”klónnak nevezünk, nagymértékű immunogén tulajdonságai miatt és RIR csirkékre is vonatkozó nem patogén tulajdonságai miatt választottuk ki. A vírus-klón adaptálása mind kacsa-, mind csirkeembrió-fibroblaszt sejttenyészetekhez (DEF illetve CEF) előnyös. A találmány egyik tárgya tehát olyan Marek-kór víruskészítmény előállítása, amely általában nem patogén baromfiakra, elsősorban csirkékre, sőt, még a nagyon fogékony Rhode Island Red csirkékre sem. A találmány egy másik tárgya olyan Marek-kór víruskészítmény előállítása, amely nagymértékben immunogén. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
