194315. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új szénhidráttartalmú antibiotikumok és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 2 194 315 V, táblázat folytatása Taxon Mezo-diamlnbpimelinsav és maduróz Antiblotikus hatás Xantin hidrolízis Metil-béta D-glükozid felhasználás Mannit Actinomadura melliaura ATCC 39691 + f- ’ + ♦ A. citrea ATCC 27887 ♦ — — — ♦ A. flava ATCC 29533 * * —♦ A. helvata ATCC 27295 + —♦ A. kijaniata ATCC 31588 ♦ ► + ♦ — A. macra ATCC 31286 + * — — — A. madurae ATCC 19425 + f —-4-A. malachitica ATCC 27888 +—♦ A. pelletiert ATCC 14816 ♦A. pusilla ATCC 27296 A. roseoviolacea + +■ + ~ A. rubra ATCC 270031 ♦ E — — ♦ A. spadix ATCC 27298 +♦ A. verrucospora ATCC 27299 ATCC 31466 — + »- .j “ ♦ Az ilyen oltóanyag előállítására alkalmas közeget az alábbiakban A táptalajként és B táptalajként ismertetjük. A beoltást és a fermentálást olyan közeg- 25 ben hajtjuk végre, amelyben a pH-t 6,5 és 8,5 között, előnyösen az oltóanyag számára 7,5 és a fermentálás számára 7,0 értéken tartjuk. A helyes pH határokat rendszerint úgy tartjuk fenn, hogy a közeghez alkalmas pufferanyagokat, így például kalciüm-karbonátot adunk. 30 A vegetatív oltóanyag előállítását és a fermentálást 27°C és kb. 40°C közötti hőmérsékleten hajtjuk végre. A vegetatív oltóanyag előállítására és a fermentálás végrehajtására legelőnyösebb hőmérséklet kb. 30°C és 35°C között van. Általában a táptalajt olyan alkalmas fermentáló 35 kádban vagy lombikban állítjuk elő, amelyet a beoltás előtt sterilizálunk. Azonban a táptalajt a felhasználás előtt 0°C alatti hőmérsékleten aszeptikus körülmények között tárolni is lehet. Az Actinomadura melliaura törzstenyészeteket fagyasztott teljes tenyészet formájában tartjuk fenn. Oltóanyag előállítása A találmány szerinti AT 2433 antibiotikum komplex termelésére előnyös életerősen fejlődő vegetatív oltóanyagot használni. Az oltóanyag előállítását általában két vagy több szakaszban hajtjuk végre. Nagy méretekben való fermentálás (például 50 liter fermentlé) esetében az oltóanyagot előnyösen három szakaszban állítjuk elő. A vegetatív oltóanyag előállítására alkalmas táptalaj összetétele a következő: À táptalaj* húskivonat 3 g triptóz 1 g cerelóz 1 g burgonyakeményítő 24 g élesztőkivonat 5g kalcium-karbonát 2g csapvízzel kiegészítve 1,0 lit» A steril A táptalaj 50 mi ének frissen felolvasztott Actinomadura melliaura teljes tenyészetet használunk. 45 50 55 60 A lombikot percenként 300 fordulatú, 5 cm löketű rázógépen 48-96 óra, előnyösen 72 óra hosszat kb. 30°C-on inkubáljuk. Második oltási szakasz Az első oltóanyag 25 ml-ével egy 2 literes Erlenmeyer lombikban levő 500 ml steril A táptalajt oltunk be. Az inkubálást az első szakaszban leírtak szerint végezzük. * A pH-t szükség esetén nátrium-hidroxiddal 7,5-re állítjuk. Harmadik oltási szakasz A második oltóanyag 25—32 mi ével oltunk be egy sorozat, 2 literes Erlenmeyer lombikban lévő 500-500 ml-nyi steril B táptalajt. A lombikokat percenként 350 fordulattal keverve, 24—72 óra hosszat, előnyösen 48 óra hosszat 30bC-ra inkubáljuk. A lombikokat a fermentlé térfogatára számított percenkénti 0,35 térfogat levegővel levegőztetjük. A találmány szerint ügy is eljárhatunk, hogy kihagyjuk a harmadik oltási szakaszt. I Antibiotikum termelés (fermentálás) A következő, B-vel jelölt táptalajt találtuk alkalmasnak az antibiotikum kielégítő és reprodukálható kitermeléssel való előállítására: B táptalaj élesztőkivonat 5 g/liter cerelóz 10 g/liter oldható keményítő 20 g/liter NZ amin (Difco) 5 g/liter kalcium-karbonát 2 g/liter kobalt(II)klorid (c: 10'® mol) 1 m/liter csapvízzel kiegészítve 1 literre, az utósterilizálás pH-ja 7,0 A fent leírt második vagy harmadik oltási szakaszban kapott oltóanyag 500 ml-ével 10 liter steriloB táptalajt oltunk be. A fermentáció keveréket 27°C és 40X közötti hőmérsékleten, előnyösen 30°C és 35°C közötti hőmérsékleten, percenként 350 6
