194306. lajstromszámú szabadalom • Eljárás antibiotikum bioszintézis befolyásolására in vivo genetikai rekombinációval
1 194 306 2 nebramicin-2-re és nebramicin-4-re rezlsztens Rhizobium melllot ti teszt organizmust használunk. A vékonyrétegkromatográfiás módszenei végzett antibiotikumkomponens-összetétel meghatározásakor 5 szilikagél (Merck, Darmstadt) vékonyrétegre a fermentléből hígítással készült 0,1 -0,5 A*g/rn] közötti mennyiségű antibiotikumot tartalmazó oldatot cseppentünk, majd kifejlesztő elegyként etfl-alhohol, metfl-etil-keton és 25%-os ammónium-hidroxid 1:1 : 1 arányú elegyét használva kromatografáljuk 10 az antibiotikum komponenseket. A kromatogramm kifejlesztése után szárítással eltávolítjuk a kifejlesztőszert és Bacillus subtilis ATCC 6633 mikroorganizmust tartalmazó táptalajt rétegezőnk a szilikagél lemez felületére, majd 37^ hőmérsékleten 16 órán át inkubáljuk a lemezt. A kromatogrammon elvá- 10 lasztott antibiotikum komponensek gátolják a tesztorganizmus növekedését. A gátlás) zónák nagyságából állapítjuk meg a nebramicin antibiotikum komponensek mennyiségét standardokkal való összehasonlítás segítségével. 20 SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás aminoglükózid típusú antibiotikumokat tartalmazó fermentlevek előállítására antibiotikum termelésére képes Streptomyces törzsek in vivo gene- 25 tikai rekombinálása és az Izolált, megváltozott genetikai állományú és megváltozott antibiotikum termelőképességű törzsekkel végzett fermentálás útján, azzal j el 1 e m e z v e, hogy genetilailag jelzett és prototróf vagy genetflailag jelzetlen Streptomyces törzsek sejtjeiből kalcium 30 ionok, magnézium ionok és szacharóz jelenlétében végzett előtenyésztést követően, protoplasztokat készítünk, a genetilaflag jelzett törzsekből kapott protoplasztokat, vagy «c a genetikailag jelzett törzs(ek)ből készített protoplasztokat és a prototróf törzsből vagy törzsekből kapott, de kémiai vagy fizikai módszerekkel inaktivált protoplasztokat fúzionáljuk, az egyesített protoplasztokat regeneráljuk, a megváltozott genetikai áDományú törzseket (prototróf, kettős auxotróf vagy szegregáns) izoláljuk, vizsgáljuk antibiotikum termelésüket és a megváltozott antibiotikum termelőképességű törzseket kiválasztjuk, majd az így kapott új törzseket süllyesztett, levegőztetett fermentációs körülmények között, szerves szénás nitrogénforrást, szervetlen sókat, nyomelemeket és állati és/vagy növényi eredetű olajokat és/vagy zsírokat tartalmazó táptalajon tenyésztjük. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a protoplasztok képzését, fúzióját és regenerálást előnyösen 0,1 -0,5% kalciumsót, 0,3-0,8% magnézium-sót és 12-34% szacharózt tartalmazó táptalajon végezzük. 3. Az 1. vagy 2. igénypont bármelyike szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy a kémiai inaktiválást kannabidiolsawal vagy valamely sójával N-etil-malein-imlddel, pirrol-nitrinnel, brflant-zölddel vagy 2-merkapto-etanoDal végezzük. 4. Az 1. vagy 2. igénypont bármelyike szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy a fizikai Inaktiválást 7-sugárral végezzük. 5. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy antibiotikumot termelő Streptomyces törzsként Streptomyces tenebrariust hasznsunk. 6. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy antibiotikumot termelő Stretpmyces törzsként Streptomyces kanamyceticust használunk. rajz nélkül Kiadja : Országos Találmányi Hivatal Felelős kiadó : Himer Zoltán KÓDEX 8
