194283. lajstromszámú szabadalom • Kémiai eljárás L 17054 antibiotikum előállítására

1

194.283

2

vetéket 400 ml jéggel hűtött dietü-éterbe öntjük. A keletkezett csapadékot szűréssel kinyertük, dietil-éterrel mossuk és levegőn szárítjuk, így 10,5 g port nyerünk, wifely az L 17054 antibiotikum tirfluor-ecetsavaddíciós sója.

A fenteob nyert termékből 3 g-ot 150 ml, 0,2%-« vizes ammónium-formiát-acetonitril 95 3 arányú keverékben szuszpendálunk és a pH-t mintegy 7,5-re állítjuk be In nátriuni-hidroxiddal.

Az így nyert oldatot alkalmazzuk a szilánozott szilikagél kromatográfiás oszlophoz (0,06-0,2 mm, Merck), amely 150 g, azonos oldószerkeverékben előállított adszorbenst tartalmaz. Az oszlopot lineáris grádiens 5%-tól 21%-ig terjedő mennyiségű acetonitrilt jelent 0,2%-os vizes ammónium-formiát oldatban, 20 ml-es frakciókat gyűjtve és ezekt a frakciókat HPLC- vel meghatározzuk. Az L 17054 antibiotikumot tartalmazó frakciókat (70-től 96-ig) összegyűjtjük és az acetonitrilt eltávolítjuk belőlük. A maradék vizes oldatot egy szilánozott szilikagél oszlophoz használjuk fel (10 g, Merck, 0,06—0,2 mm) desztillált vízben. Miután az oszlopot vízzel addig mostuk, míg a sók teljesen eltűntek, a terméket acetonitiil/víz 1:1 keverékkel eluáljuk. Az összegyűjtött oldatot kis térfogatra koncentráljuk és a szilárd anyagot aceton hozzáadásával kicsapjuk. Szobahőmérsékleten történő szárítás után 2,4 g lényegében tiszta L 17054 antibiotikumot nyerünk.

Lényegében a fenti eljárást követve, de kiindulási anyagként teicoplanin A2 ét A3 alkotóelem, teicoplanin Aj akotóelem 1. komponens, teicoplanin A2 alkotóelem 2. komponens, teicoplanin A2 alkotóelem 3. komponens, teicoplanin A2 alkotóelem 4 komponens vagy teicoplanin A2 alkotóelem 5. komponens keverékét használjuk, azonos végterméket nyerünk gyakorlatilag azonos kitermeléssel.

10

15

20

25

30

35

SZABADALMI IGÉNYPONTOK

1. Eljárás az (I) általános képletü L 17054 antibiotikumnak megfelelő antibiotikum vegyület és farmakológiailag elfogadhatósav addídóssóinak előállítására, ahol A jelentése hidrogénatom, B jelentése N-acetÜ- ßD-glükóza mini 1-csoport és Z jelentése oD-mannozil-csoport,

továbbá az alábbiakkal is jellemezhető:

a) fajlagos forgatóképessége lajfö « -34 (C = 1%, dimetil-formamid,

b) kitűnően oldódik vízben pH > 8,0 értéknél, valamint dimetil-formamidban, dimetil-szulfoxidban, propilén gükolban és metilcelk>szolv-ban, gyengén oldódik metanolban, csaknem oldhatatlan etil-éterben és acetonban,

c) ultraibolya abszorpciós spektruma a következő abszorpciós maximumokat mutatja:- 0,1 n sósav-oldatban:

max * 278 nm (Ej'0 = 60,6)

— 0,1 n nátrium-hidroxid-oldatban: max = 297nm(E}% cm «118,8)

a foszfát pufferben (pH 7,4)

max ' 277 nm(Ej%cm “70.3)

d) Infravörös spektruma nujolban a következő abszorpciós maximumokat mutatja(cm_l ):3700-2000 2970-2850/nujol/, 1655, 1610, 1595, 1515, 1490,

40

45

50

55

60

1460/nujol/, 1375/nujol/, 1300, 1230, 1145, 1060, 1020, 970,890,880,820, 720/nujol/,

e) elemanalizise, miután előzetesen Inert atmoszférában 140°C hőmérsékleten szárították (tömegveszteség 7,8%) a következő hozzávetőleges százalék® összetételt jelzi (átlag): szén: 55,46%, hidrogén: 4,50% nitrogén: 7,20%, klór: 4,67%, hamu: 0,2%,

f) Rf értékei az alább megadott TLC rendszerekben

Futtató rendszer (térf/térf.) Rf érték

I. acetonitril/víz 75:25 0,32

(Merck 60 F2S4 szilikagélen),

II. acetonitril/5% vizes nátriumszulfát oldat 0,61

(Merck szilánozott 60 F254

szilikagélen),

megjelenítés UV fénnyel 254 nm hullámosszon vagy 3%-os ninhidrinnel vagy 1 %-os fluoreszcaminnal,

g) retenciós ideje (ír) 8,3 perc, HPLQvel végzett elemzés alapján 150 x 4,0 nm-es Zorbax®ODS (5-6 m) oszlopot használva (Zorbax a Dupont Co. gyári védjegye egy oktadedl-szilán szilikagél mátrixra) és egy lineáris gradienssel eluálva 2 ml/perc. áramlási sebességgel, súrol a lineáris gradiens 40 perc alatt 0%tói 50%-ig növekvő B oldat A oldatban (A oldat: 25 mmól/liter NaH2P04) acetonitril 9:1, pH 6,0-ra pufferolva 0,ln NaOH-val, és a B oldat: 25 mmól/liter NaH2P04 (acetonitril 3:7, pH 6j0-ra pufferolva 0,1 n NaOH-vàl), a HPLC meghatározásnoz belső standardként 3,5-dihidroxi-toluolt (tR * 5,60 perc) használva,

h) 270 MHz-nél DMSO-d6-ban 60°C hőmérsékleten 20 mg/ml mintakoncentrációban rögzített 1H-NMR spektrumainak (belső standard: TMS (trimetil-szílán)

= 0,00 ppm) több adata a D20 kicserélési és szelektív csatolás-bontási kísérletek után ( ppm, sokszorozódás: 1,88, s, 2,85, d, 3,5, dd, 3-4, 4,20, d, 4,48, d, 4,50, d, 4,62, s, 4,96, ddd, 5,18, d, 5,31, s, 5,35, d, 5,39, s, 5,68, d, 5,71, s, 6,20, d, 6,41, s, 6,51, s, 6,56, s, 6,74, d, 6,77, s, 6,80, s, 6,80, d, 6,98, d, 7j08 s, 7,15, d, 7,21, d, 7,28, d, 7,35, d, 7,50, d, 7,56, d, 7,64, d, 7,73, d, 7,86, d, 8,42, d,

i) potendometriás titrálasi profilja három titrálási lejtést mutat 1/2 pH értékekkel 5,0-nál (1 egyenérték) 7,0-nál (1 egyenérték) és 11,0-nál (5-egyenérték) metilcelloszolv/víz 4:1 keverékben, a vizsgált vegyület oldatát, amely 0,01n HC1 fölöslegét tartalmazza metilcelloszolv/víz 4:1 keverékben, ugyanebben az oldószerkeverékben levő D,01n NaOH-val titrálva,

l) egy savas funkciója képes sókat képezni,

m) egy bázisos funkciója képes sókat képezni

azzal jellemezve, hogy a teicoplanin antibiotikumot, vagy ennek alkotóelemeit vagy komponenseit vagy a fenti alkotóelemek vagy komponensek bármilyen arányú keverékét szabályozott savas hidrolízisnek vetjük alá erős szerves sav koncentrált vizes oldatában, szobahőmérséklet körüli hőmérsékleten és a vegyületet kívánt esetben tisztítás után kinyerjük.

2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy erős szerves sav koncentrál vizes oldataként 75-95%-os trifluor-ecetsavat alkalmazunk.

3. Az 1. vagy 2. igénypontok szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy erős szerves sav koncentrált vizes oldataként 90%-« trifluor-ecetsavat alkalmazunk.

4. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a savas hidrolízist 10°C és 50ÖC kö-4