194281. lajstromszámú szabadalom • Kémiai eljárás az L 17392 antibiotikum (deglukoteikoplamin) és savaddíciós sói előállítására
2 1 és 20 nú 2n H2S04-et adunk hozzá cseppenként, hűtés közben. A reakciókeveréket azután átvisszük egy forgó bepárlóba és 65°C hőmérsékleten melegítjük 1 órán át atmoszférikus nyomáson, majd további 30 percen át vákuumban (20 Hgmm 2,63.103Pa), hogy eltávolítsuk a víz legnagyobb részét. 65°C hőmérsékleten 20 órán át történő további keverés után a reakciókeveréket szobahőmérsékletre lehűtjük, majd 800 ml dietil-éterbe öntjük. A csapadékot szűrőn összegyűjtjük, majd 1 liter metanol/víz 1:3 (térf./térf.) keverékben feloldjuk. Az így nyert oldatot kétszer 500 ml etil-acetáttal extraháljuk és a szerves réteget elöntjük. A vizes réteget azután kétszer 500 ml butanollal extraháljuk és az alkoholos oldatot kis térfogatra koncentráljuk. 500 ml aceton hozzáadásával szilárd csapadékot nyerünk, amelyet szűrön összegyűjtünk és vákununban 40°C hőmérsékleten szárítunk 18 órán át, 2,25 g nyers terméket kapva, amelyet azután az 1. példa második része szerint dolgozunk fel, 0,75 g kristályos tiszta deglükoteikoplanint nyerve. 8. példa Degliikoteikoplanin készítése L 17046 antibiotikumból 5,4 L 17046 antibiotikumot szuszpendálunk 90 ml n-oktanolban és 25 ml 2n H2S04-et adagolunk be cseppenként, miközben hűtést alkalmazunk—5°C hőmésékletnél. A reakciót azután forgó bepárlóban hajtjuk végre, amint ezt a 7. példában leírtuk. A keverést 18 órán át folytatjuk és a terméket izoláljuk és tisztítjuk a 7. példában leírt módon, 0,3 g kristályos tiszta deglükoteikoplanint nyerve. 9. példa Degliikoteikoplanin készítése teikoplanin A2 alkotórészből 5 g teikoplanin A2 alkotórész (aza a 4,239,751 lajstromszámú amerikai egyesült államok-beli szabadalmi leírás szerint nyert teichomicin A2 (150 ml 1- pentanollal képzett szuszpenzióját, amely 37%-os (tömeg/térf.) vizes HCl-el telített, kevertetjük 70°C hőmérsékleten 6 órán át. Azután a víz nagy részét fokozatosan eltávolítjuk csökkentett nyomáson (20 Hgmm 2,63.103 Pa) és a zavaros oldatot további 2 órán át kevertetjük szobahőmérsékleten. Dietil-étert (300 ml) adunk azután a reakciókeverékhez és a kicsapódott szilárd anyagot szűréssel összegyűjtjük, die til -éterrel mossuk és vákuumban szárítjuk 40 C hőmérsékleten 18 órán át káliunvhidroxid fölött, 4,6 g nyers sárga port nyerve. Ezt a nyers terméket feloldjuk 500 ml n-butanol/metanol/víz 7:1:2 (térf./térf./térf.) keverékben. Az így nyert oldatot kétszer 250 ml vízzel extraháljuk, míg a vizes réteg pH-ját 0,1 n NaOH hozzáadásával 9-re állítjuk be. Az egyesített vizes rétegeket kis térfogatra koncentráljuk csökkentett nyomáson (20 Hgmm 2,63.103Pa). Ezután 0,ln NCl-t adunk pH 5,6 érték eléréséig és a szilárd anyagot, amely_itt elkülönül, szűréssel összegyűjtjük, dietil-éterrel mossuk és 40 C hőmérsékleten szárítjuk három napon át, a folyamat 0,88 g nyers terméket ad, amelyet a 4. példa utolsó része szerint dolgozunk fel. Kitermelés: 0,51 g lényegében tiszta deglükoteikoplanin. 10. példa Deglükoteikoplanin készítése teikoplanin komplexből 2,5 g teikoplanin komplexet (azaz olyan antibiotikum komplexet, amely teichomicin Aj, A2 és A3 alkotórészeket tartalmaz és amelyet az ATCC 31121 törzs fermentációjával nyertek a 4,329,751 lajstromszámú amerikai egyesült államok-beli szabadalmi leírás szerint) azonos módon kezelünk, mint ahogyan ezt a 9. példában leírtuk, az alkalmazott oldószerek és reagensek arányos hányadát alkalmazva. A lényegében tiszta teikoplanin kitermelése 0,16 g. 11. példa Deglükoteikoplanin készítése teikoplanin komplexből 20 g teikoplanin komplexet (azaz olyan antibiotikum komplexet, amely teichomicin Ai, A2 és A3 alkotórésezeket tartalmaz és amelyet az ATCC 31121 törzs fermentációjával nyertek a 4,329,751 lajstromszámú amerikai egyesült államok-beli szabadalmi leírás szerint) szuszpendálunk 300 ml 0,5n abszolút trifluor-etanolos sósavoldatban és a szuszpenziót 80°C hőmérsékleten melegítjük keverés közben, miközben folytonosan vízmentes sósavgázt buborékoltatunk át 12 órán keresztül. Szobahőmérsékletre hűtés után a reakciókeveréket leszűrjük és az összegyűjtött szilárd anyagot dietiléterrel mossuk, majd 1 liter vízben szuszpendáljuk, A vizes szuszpenzió pH-ját 1,9-re állítjuk be ln HC1 beadásával és a nyert oldatot 1 liter n-butanol/etil-acetát 1:2 (térf./térf.) keverékkel extraháljuk. A szerves fázist NaCl-el telített vízzel mossuk (500 ml), majd kis térfogatra koncentráljuk. 500 ml dietü-éter hozzáadásával szilárd csapadék képződik, amelyet szűréssel összegyűjtünk, dietil-éterrel mosunk és levegőn szárítunk, 18,6 g nyers terméket nyerve. Ezt a nyeis terméket 1 liter metanolban feloldjuk és 25 g szilánozott szilikagélt (0,06—0,2 mm, Merck) adunk hozzá, majd az oldószert vákuumban 35°C hőmérsékleten eltávolítjuk. A maradékot 500 ml acetonitril/5%-os vizes ammónium-formiát 1:9 arányú keverékben szuszpendáljuk és egy 2,5 kg azonos szilánozott szilikagéllel készített oszlop tetejére visszük, az oszlopot előzőleg 1 liter 10%-os vizes ammónium-formiát oldattal pufferoltuk és 500 ml acetonitril/5%-os ammónium-formiát 1:9 arányú keverékkel stabilizáltuk. Az oszlopot ezután 2 liter víz/acetontiril 1:9 arányú keverékkel mossuk, majd 8 liter lineáris gradienssel kifejlesztjük, a lineáris gradiens 10% acetonitriltől 40% acetonitrilig teljed vízben. 20 ml-es frakciókat szedünk és HPLC- vel vizsgáljuk ezeket. A 71.—420. frakciókat egyesítjük, és 4 liter butanol hozzáadása után kis térfogatra koncetnráljuk. Die til-éter hozzáadása után csapadékot nyerünk, amelyet szűréssel összegyűjtünk, dietil-éterrel mosunk, majd levegőn szárítunk, 6,5 g lényegében tiszta deglükoteikoplanint nyerve. Kristályos tiszta deglükoteikoplanint úgy nyerünk, ha ezt a terméket azonos eljárásnak vetjük alá, mint amelyet az 1. példa utolsó részében leírtunk. 3,5 g kristályos, tiszta deglükoteikoplanint nyerünk, amelynek fizikokémiai jellemzőit korábbi példákban már leírtuk. 194.281 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 13
