194280. lajstromszámú szabadalom • Eljárás Új, nagy hatékonyságú gonaldoliberin-analógok és az ezeket tartalmazó gyógyaszati készítmények előállítására
1 2 Glp- His-Trp-Ser-Tyr—AspíOMe^Leu-Arg-ProetiJamid-biszítrifluor-acetát) sót feloldunk 8 ml dimetil-formamidban és 1,2 ml (8,64 mmól) trietüaniint adunk hozzá, majd az oldatot 25 °C-on 88 órán át állni hagyjuk. Ezután a re akcióé le gyet bepároljuk, majd rögtön ezután 30 ml ecetsavat adunk hozzá, és ezt le is pároljuk. A maradékot éterrel eldörzsöljük, az étert dekantáljuk és liofilizáljuk. A liofilizált terméket 5,2 ml 0,01 mól/l vizes sósav-oldatban feloldjuk és az oldatot újra liofilizáljuk. így 21,4 mg (98,7%) cím szerinti peptidet kapunk. Móltömeg: 1267. [a]25 = 52,1 ° (c = 1,1%, metanol). Rf =0,57, Rf10 =0,58. 3. példa Glp—His~ T rp—Ser— T yr— Asp(OBzl)—Leu— Arg— Pr oetilamid-diacetát a) Boc— Asp(OBzl)-Leu— Arg- -Pro-etilamid 490 mg Leu—Arg-Pro-etilamid-dihidroklorid sót 10 ml dimetil-formamidban oldunk, majd az oldatot 0 °C-ra hú'tjük, és keverés közben 5 mg Boc—Asp (OBzl)—OPFP 10 ml dime til formamiddal kcs/.ült oldatát adjuk hozzá. Ezután a reakcióelegy pH-ját trietil-aminnal (280 pl) 7-re állítjuk be, és a keverést 1 órán át 0 °C-on, majd szobahőmérsékleten 12 órán át folytatjuk. Az oldószert vákuumban eltávolítjuk, a maradékot szilikagél oszlopon (2 x 95 cm méretű) etil-acetát — piridin — ecetsav — víz 90 : 20 : 6 : 11 arányú elegyével kromatografáljuk. A cím szerinti vegyülctet tartalmazó frakciókat egyesítjük, vákuumban bepároljuk, a bepárlási maradékot éterrel eldörzsöljük. Így fehér por formájában 110 mg cím szerinti vegyületet kapunk. O.p.: 111-113 °C. Rf‘ =0,45. b) II-Asp(OBzl)—Leu—Arg-Pro-etilamid-bisz(trifluor-acetát) 210 mg Boc—Asp(OBzl)—Leu—Arg—Pro-etilamid 4 ml trifluor-eeetsawai készített oldatát 30 percen át szobahőmérsékleten keverjük. A reakcióelegy et ezt követően vákuumban bepároljuk, a maradékot éterrel eldörzsöljük, szűrjük és szárítjuk. így 210 mg szilárd cím szerinti vegyületet kapunk. Op.: 98-103 °C. Rf‘ =0,25. c) Glp -His- Trp—Ser—Tyr—Asp(OBzl)—Leu—Arg— Pro-etilamid-diacetát 100,3 mg GIp-His-Trp—Ser-Tyr—N2H3 pentapeptid-hidrazidot feloldunk 2 ml dimetil-formamidban, az oldatot —10 °C-ra hűtjük és keverés közben 100 pl 6N vizes sósav-oldatot, majd 11 mg nátriumnitrit tömény vizes oldatát adjuk hozzá. 5 perc elteltével 116 mg H— Asp(OBzl)— Leu—Arg -Pro-etilamid-bisz(trifluor-acetát) só 0,5 ml dímetilformamid és 100 pl trictil-amin elegyével készített oldatát adjuk a kevert reakcióelegyhez. Ezután apH-t szükség esetén 7-re állítjuk. A keverést —10 °C-on 1 órán át, 0 °C-on 24 órán át folytatjuk. Ezt követően az oldószert vákuumban lepároljuk, a maradékot Sephadex G-25 töltetű oszlopon (1 x 60 cm méretű) 10%-os vizes ecetsav-oldattal frakcionáljuk. A megfelelő frakciók egyesítése, bepárlása után a kapott maradékot az 1. példában ismertetett módon fordított fázisú kromatográfiával tisztítjuk. Oldószerként 10 tf% 2-propanol és 90 tf% 0,1%-os vizes tri fluor-e ce tsav-oldat elegyét (350 ml) használjuk úgy, hogy a tisztítás végére a 2-propanol aránya a 40 tf%-ot elérje. A cím szerinti vegyületet tartalmazó frakciókat egyesítjük, bepároljuk, híg vizes ecetsav-oldatban oldjuk, majd liofilizáljuk. így 80 mg cím szerinti szilárd anyagot kapunk. Rf6 = 0,6. Aminos av-analízis: Asp = 0,99; Ser = 0,79; Glu = 1,03; Pro = 1,0; Leu = 1,3; Tyr = 0,83; His = 0,77; Arg = 1,2. A triptofánt és az etilamint nem határoztuk meg. 4. példa Glp- His- T rp— Se r— Db t— Asp(OMe)— Leu— Arg— Pr oe tilamid-diacetát a) Boc— Trp-Ser- Dbt— OMe 42 g Boc-Trp)G'PFP aminosav-származékot és 4,6 g H—Ser—Dbt— OMe dipeptidet feloldunk 60 ml dioxán és 20 ml etil-acetát 0 °C-ra lehűtött elegyében, majd az oldatot 1 órán át 0 °C-on és 24 órán át 20 °C-on keverjük. Ezt követően a reakcióelegyből az oldószert kidesztilláljuk, majd a maradékot etilacetátban feloldjuk, és 5%-os vizes citromsav-oldattal 0 °C-on, majd telített, vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal és telített, vizes nűtrium-klorid-oldattal három-háromszor szobahőmérsékleten kirázzuk. A szerves fázist vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk, szűrjük, majd vákuumban bepároljuk. A maradékot etil-acetátban oldjuk, cs petroléter hozzáadásával kicsapjuk. A kivált anyagot szűrjük, petroféterrel mossuk, szárítjuk. így 6,8 g dm szerinti anyagot kapunk. Móltömeg: 727. Rf5 = 0,75. Op.: 118-121 °C. b) H-Trp—Ser—Dbt—OMe-hidroklorid 3,5 g Boc-Trp—Ser-Dbt—OMe tripeptidet feloldunk 60 ml 4 mól/l metánolos hidrogén-klorid-oldatban, majd az oldatot 2 órán át 20 cC-on keverjük. Az oldószert vákuumban lepároljuk, a maradékot metanolban oldjuk, majd vákuumban ismét bepároljuk. A bepárlási maradékot szilárd nátrium-hidroxid felett vákuumban szárítjuk, végül etanolból éter hozzáadásával kicsapjuk, szűrjük, szárítjuk. így 2,5 g cíin szerinti anyagot kapunk. Mól tömeg: 663. Op.: 215-217 °C. Rf‘ =0,45. c) Glp—His—Trp-Ser—Dbt—OMe 393 mg Glp-His—N2H3 dipeptid-hidrazidot 35 ml dimetil-formamidban szuszpendálunk, 0,7 ml 6 mól/l vizes sósav-oldatot adunk hozzá, majd a szuszpenziót —10 °C-ra hűtjük. Ezt követően keverés közben 106 mg nátrium-nitrit tömény, vizes oldatát adjuk hozzá, majd 5 perc elteltével 927 mg H-Trp—Ser 194.280 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 80 5
