194262. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új n-glikozilezett karbonsavamid származékok és azokat tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 194.262 2 A humorális Immunitás fokozása in vivo: a juh■eritrociták elleni antitestek képződésének fokozása egér esetén NMRI fajtájú egereket I07 SE intraperítoneális befecskendezésével immunizáljuk. 5 nap elteltével a lépet eltávolítjuk és az SE ellen antitesteket szintetizáló sejtek számát meghatározzuk. Második kísérletben az állatok szérumában a hamagglutináló antitestek titerét határoztuk meg. Az alkalmazott SE-dózis (107 ) optimum alatti dózis, azaz csak kevés limfocitát tud serkenteni az antitestek szintézisére. A találmány szerint előállított vegyületekkel járulékosan kezelt állatok esetén (1,0—100 mg/kg i.p. vagy 8.c.) viszont az antitesteket gyártó sejtek száma 5-10- szerese volt a kontrollnak, a szérum antitest-titere szignifikánsan magasabb volt. A vegyületek immunitás-fokozó hatásának az (egyéb baktérium eredetű immun-serkentőkkel ellentétben) előfeltétele azonban az antigén; azaz a vegyületek applikálása csak SE-vel immunizált állatokban vezet az SE elleni antiestek titerének emeléséhez, nem-immunizált állatok esetén ilyen hatás nincs. A humorális immunitás fokozása in vivo: az ovalbumin elleni antitestek képződésének serkentése NMRI-fajtájú egereket 50 (jg ovalbumin intraperitoreális befecskendezésével immunizálunk. A kezelés után 7, 14 és 21 nappal szérum-mintákat veszünk, és a passzív haemagglutináció segítségével megvizsgáljuk az ovalbumin elleni antitestek mennyiségét. Az alkalmazott dózisban ovalbumin szub-optimális az egerek számára, azaz antitest képződését vagy egyáltalán nem, vagy csak igen csekély mértékben tud kiváltani. Az egerek kezelése immunfokozó anyagokkal, antigén beadás előtt vagy után, a szérum antitest-titerének emelését eredményezi. A kezelés eredményességét az elért Score-értékkel, azaz a három mintavételi napon mért titerek különbségének összegezett logaritmusával fejezzük ki. Ebben a kísérleti -elrendezésben az (I) általános képletű vegyületek — az immunizálás napján 1-100 mg/kg i.p. vagy s.c. applikálva — az ovalbumin elleni antitestek képződését szignifikánsan fokozzák. Makro fágok aktiválása A test nem-specifikus védőrendszerében a makröfágok központi szerepet játszanak. Antigénekre jellemző módon fokozott anyagcserével reagálnak (makrofág-aktiválás), ami főleg fokozódó szekrétum-kiválasztásként mutatható ki. Ki tudtuk mutatni, hogy a találmány szerinti vegyületek antigénnel, pl. Candia albicans-szal együtt a makrofágok aktiválását fokozzák. Megmértük a citotoxikusan ható peroxid felszabadítását. A vegyületek hatására a peroxid képződése legalább 2-szeresére fokozódott. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 Toxicités Bár a leírt vegyületek potencirozó hatása egér esetében már 10 mg/kg i.p. vagy s.c. dózis után már jelentkezik, a 100 mg/kg dózis sem okoz toxikus hatást. A vegyületek ezért jól összeférhetőknek mondhatók. A találmány szerinti vegyületek egyrészt antigénnel kombinálva annak immunogenitását fokozzák, másrészt rendszeres alkalmazás esetén a szervezet immunológiai reaktivitását erősítik. A vegyületek képesek az antitesteket képző limfociták aktiválására. A fentiek miatt az új vegyületek oltóanyagok adjuvánsaként az oltási eredményt fokozzák, valamint az immunitás által szerzett fertőzések elleni védelmet erősítik. A vegyületek — a legkülönöbözőbb antigénekkel összekeverve — a diagnosztikai és terápiás célokat szolgáló antiszérumok kísérleti és ipari előállításában is alkalmazhatók adjuvánsként. Végül a vegyületek antigének egyidejű adagolása nélkül is alkalmazhatók már meglévő, de még nem mainfestálódó védőreakciók felerősítésére, ember és állat esetén egyaránt. A vegyületek tehát különösen alkalmasak a test védőmechanizmusának serkentésére, így pl. idült és heveny fertőzések vagy szelektív (antigén-specifikus) immunológiai rendellenesség, valamint veleszületett vagy szerzett általános (tehát nem antigén-specifikus) immunológiai rendellenesség (öregkori, vagy súlyos elsődleges betegség'alatt, vagy pedig ionizáló sugárzással vagy immunoszuppresszív anyagokkal végzett kezelés után fellépő rendellenesség) esetén. A vegyületeket tehát antibiotikumokkal, kemoterápiás hatóanyagokkal vagy egyéb gyógymóddal kombinálva is alkalmazhatjuk, immunológiai károsodás kivédésére. Végül a vegyületek ember és állat esetében egyaránt a fertőző betegségek általános kezelésére alkalmasak. Az egérben szisztémásán előidézett kandidiózis esetén a vegyületek a túlélési hányadot javítják. A kísérlet leírása SFF-CFi fajtájú egereknek intravénásán Candida albicans sejtjeit logaritmikusán növekvő mennyiségben adtuk be 2—6 x 10s db fiziológiás konyhasó-oldattal készített szuszpenzió alakjában. A fertőzés utáni 3. napon mutatkoznak a kezeletlen kontrolion az első tünetek. Az 5. napon az első állatok már elhullottak, akut vese elégtelenség miatt, és a fertőzés utáni 14. napon rendszerint a kontroll több, mint 80%-a elhullott. Ebben a tesztben az (I) általános képletű vegyületek egyrészt késleltetik a betegséget, másrészt terápiás hatásuk is van. A vegyületek 24 órával a fertőzés előtt 1 -50 mg/kg egyszeri dózisban előnyösen i.p., de s.c. is applikálva szignifikánsan késleltető hatást mértünk. 2. Táblázat Candidá-val fertőzött CFj-fajtájú egerek túlélési hányada az új vegyületekkel végzett i.p. előkezelés után Előállítási példa sorszáma Kontrol túlélési hányada ______14.napon______ Előkezelt csoport túlélési hányada 14. napon 14 1/10 4/10 44 1/10 4/10 46 0/10 4/10 49 0/10 6/10 50 0/10 4/10 57 0/10 4/10 58 0/10 4/10 59 0/10 6/10 5
