193936. lajstromszámú szabadalom • Fusarium oxysporum lipázt tartalmazó mosószer adalékanyag
5 193936 K2HP04 2 Na2HP04 3 szója olaj A sterilizálást 40 percig 121°C-on végez- 5 zük. 100 ml táptalajt tartalmazó 500 ml-es Erlenmeyer lombikot 107 db spórával inokulálunk, amelyet előzetesen DSM 2672 Fusarium oxysporummal inokulált kenetről veszünk. A lombikot 25-30°C-on, 2-5 napig, 230 io ford/perc érték alkalmazásával rázatjuk. A hozam 30-80 LU/ml. 2. példa Ezen példa és a 3-15. példák a találmány szerinti eljárással előállított enzimes mosószer adalékanyag aktív hatóanyagának 2 literes laboratóriumi fermentorban történő előállítását mutatják be. Egy 500 ml-es Erlenmeyer lombikban az alábbi 260 ml táptalajt készítjük el: glükóz 24 g/1 búza áztató folyadék 24 g/l szója-olaj 3,8 g/l kálciumkarbonát 3,8 g/l pH=5,5 a kálciumkarbonát beadagolás előtt. A sterilizálást 40 percig, 121°C-on végezzük, Az 1. példa eljárása szerint agar-agar táptalajról spórák inokulálását végezzük, majd a táptalajt 2 napon át 30°C-on, 230 ford/perc érték alkalmazásával keverjük. Az így beoltott kultúra 120 ml-ét 2 literes, 1,3 liter 1 órán át 121°C-on sterilizált, és az alábbiak szerinti összetételű: 15 20 25 30 35 glükóz 50 g/l szójabab liszt 50 g/l K2HP04 2,0 g/l Na2HP04.2H20 3,0 g/ szója-olaj 10,0g/l Pluronic nemionos poliéter-glikol emulgátor 0,3 ml táptalajt tartalmazó fermentorba visszük át. Az inokulálást követően 700 ml/perc levegőztetést kezdünk, és az elegy et az első 24 órában 600 ford/perc sebességgel, majd 800 ford/ /perc sebességgel keverjük. A hőmérséklet értéket 30°C-on tartjuk, és a fermentálást 100 órán át végezzük. Ezalatt a pH érték 6,3-ról 8,5-re emelkedik. A felúszót analizáljuk a lipáz aktivitása 90 LU/ml értékű. Kísérlet-sorozatot hajtottunk végre a 2. példa eljárása szerint. A hőmérsékletet az alábbi táblázat szerinti módon változtattuk: 40 45 50 55 Példaszám 34567 Fermenfor hőmérséklet °C 28 30 32 34 36 60 LU/ml felúszó 60 90 125 140 60 65 A fenti táblázat adataiból kitűnik, hogy az optimális hőmérséklet 34°C körüli. A pH hatásának vizsgálatára kísérlet-sorozatot végeztünk a 34°C-on a 6. példa eljárása szerint, az ott leírt pH értéktől eltekintve. Az egyik esetben (8. példa) a fermentorban a pH értéket foszforsav beadagolásával az első 24 óra után 6,5 értéken tartottuk, a másik kísérlet során (9. példa) a pH értéket az egész fermentáció ideje alatt nem szabályoztuk. Az első 24 órában egyik esetben sem szabályoztuk a pH értéket. Az eredményeket az alábbi táblázatban foglaljuk össze: 6 Példaszám 8 9 Fermentorban lévő hőmérséklet 34 34 24 óra után 6,5 értéken tartva X pu szabályozás nélkül X Felúszó LU/ml 180 140 A fenti eredményből kitűnik, hogy a lipázhozam növelhető, ha a pH értéket a fent leírt módon szabályozzuk. A keverés hatásának meghatározására a 8. példa szerinti eljárást ismételtük meg a keverés adatainak kivételével: a keverő 600 ford/ /perc sebességi értékét emeltük az első 24 óra fermentáció ideje után az alábbi módon: Az eredményeket az alábbi táblázatban foglaltuk össze: Példaszám 10 11 12 Hőmérséklet a fermentorban °C 34 34 34 24 óra eltelte után a pH érték 6,5 értéken tartva X X X Keverő sebessége ford/perc 700 800 900 LU/ml felúszó 100 180 160 A fenti eredményekből kitűnik, hogy a keverés optimális értéke 800 ford/perc. A fermentáció táptalajában szója-olaj koncentráció értékének hatását a hozamra három 4
