193866. lajstromszámú szabadalom • Eljárás humán növekedési hormont kódoló DNS-szekvenciát tartalmazó plazmid E. coli baktérium előállítására

193866

SZABADALMI IGÉNYPONTOK

33

1. Eljárás humán növekedési hormont kódoló génnek Escherichia coli ba történő transzformálására alkalmas plazmid előállítására, azzal jellemezve, hogy

(1) humán hipofízis-sejtekből mRNS-t izolálunk kaotrop kationt, kaotrop amiont és diszulfid-kötést hasító szert tartalmazó ribonukleáz-gátló szer jelenlétében végzett homogenizálással,

(2) az elválasztott mRNS-t dATP, dCTP, dGTP és TTP jelenlétében valamely reverz transzkriptázzal inkubáljuk,

(3) az így szintetizált cDNS-t dATP, dCTP, dGTP és TTP jelenlétében valamely reverz transzkriptázzal vagy DNS polimerázzal inkubáljuk,

(4) az így nyert kétszálú cDNS végeihez önmagában ismert módon olyan kapcsoló DNS láncot kapcsolunk, mely komplementer egy E. coli plazmid restrikciós endonukleázzal végzett hasítása után keletkezett láncvégekkel,

(5) E. coli plazmidot valamely restrikciós endonukleázzal hasítunk és a hasított plazmidról alkalikus foszfatázzal eltávolítjuk az 5’-terminális foszfát-csoportot, és

(6) a kapcsoló DNS-szekvenciát tartalmazó kétszálú DNS-láncot és a kezelt plazmidot DNS-ligáz és ATP jelenlétében inkubáljuk. (Elsőbbsége: 1978.04.19.)

2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy olyan ribonukleáz-gátló szert alkalmazunk, mely kaotrop kationként guanidinium-iont, kaotrop anionként tiocianát-iont és diszulfid-kötést hasító szerként ß-merkapto-etanolt tartalmaz. (Elsőbbsége:

1978.04.19. )

5 3. A 2. igénypont szerinti eljárás, azzal

jellemezve, hogy olyan ribonukleáz-gátló szert alkalmazunk, mely a 4 M guanidinium-tiocianátot és 0,2 m ß-merkapto-etanolt tartalmaz. (Elsőbbsége: 1977.05.27.)

10 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az (5) lépésben az E. coli plazmidot Hindii], Hsul vagy EcoRI endonukleázzal hasítjuk pH=7,6 értéknél 37°C hőmérsékleten. (Elsőbbsége: 1978.04.19.)

'Iz 5. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy E. coli plazmidként pBR322 plazmidot alkalmazunk. (Elsőbbsége: 1978.04.19.)

2C

6. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy E. coli plazmidként pMB—9 plazmidot alkalmazunk. (Elsőbbsége:

1978.04.19. )

25 7. Eljárás humán növekedési hormont kódoló nukleotid szekvenciával rendelkező Escherichia coli baktérium előállítására, azzal jellemezve, hogy az 1—6. igénypontok bármelyike szerint előállított plazmidot E. co-3Q lival inkubáljuk. (Elsőbbsége: 1977.05.27.)

8. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy olyan ribonukleáz-gátló szert alkalmazunk, mely kaotrop kationként guanidinium-iont tartalmaz.

(Elsőbbsége: 1977.06.09.)

34

1 lap rajz, 1 ábra

18