193850. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 7-(dimetil-amino-metilidén-amino)-9a-metoxi-mitozán ampulla belsejében történő leválasztására
193850 mazó diklórmetánt használva. A zöldszínű főfolt extrakciójával 78 mg (43%) amorf, szilárd anyagot különítettünk el, amelynek az MMR spektruma és a vékonyréteg-kromatografálás megfigyelt viselkedése azonos volt a fentiek szerint előállított 7- (dimetil-amino-metilidén-amino) -9a-metoxi-mitozánéhoz (a termelésre vonatkozó értéknél figyelembe vettük a regenerált mitomicin C mennyiségét is). Az amorf 7- (dimetil-amino-metilidén-amino)-9a-metoxi-mitozánt úgy alakíthatjuk át kristályos anyaggá, hogy az amorf vegyületet acetonban és/vagy etanolban oldjuk, majd a kapott oldatot éterhez adjuk. Előnyösen az amorf vegyület oldatát hosszabb idő alatt, például 20 perc alatt adjuk hozzá az éterhez. A kristályos 7-(dimetil-amino-metilidén-amino)-9a-metoxi-mitozánt úgy is előállíthatjuk, hogy az amorf (I) képletű vegyületet etiléterben szuszpendáljuk, majd a szuszpenzióhoz kevés kristályos 7- (dimetil-amino-metilidén-amino)-9a-metoxi-mitozánt adunk. Ekkor az amorf 7- (dimetil-amino-metilén-amino) - -9a-metoxi-mitozán kristályos anyaggá alakul át. Könnyen készíthetünk oldatot a 7-(dimetil-amino-metilidén-amino) -9a-metoxi-mitozánból tercier-butanol vagy legfeljebb 20 súly % etanolt tartalmazó tercier-butanol segítségével. Ezek az oldatok legalább 48 órán át stabilak 24 °C-on. Az oldatokat szűréssel sterilezhetjük, és steril ampullákba tölthetjük. Az oldószert eltávolíthatjuk szublimálással, és ekkor szivacsos, olivazöld, amorf anyagot kapunk, vagy 25-30 °C-on végzett szabályozott elpárologtatással, és ekkor sötétzöld, főleg kristályos, üvegszerű maradék képződik. Mindkét szilárd forma eléggé stabil a gyógyászati felhasználáshoz. Ha a találmány szerinti tercier-butanolt alkalmazunk, több előnyt is tapasztalunk. Tercier-butanollal nagyon stabil oldatot kapunk, amelyet jól kezelhetünk, ellentétben a 7- (dimetil-amino-metilidén-amino) -9a-metoxi-mitozán vizes oldatával, amely instabil. Emellett a tercier-butanol könnyen szublimálható, ezért az eltávolítása nem jelent nehézséget. Továbbá, a tercier-butanollal készült oldatból lényegesen stabilabb alakban válik ki a 7-(dimetil-amino-metilidén-amino)-9a-metoxi-mitozán, mint amilyen a korábban leírt amorf 7-(dimetil-amino-metilidén-amino) -9a-metoxi-mitozán. A 7- (dimetil-amino-metilidén-amino) - -9a-metoxi-mitozán ampulla belsejében történő találmány szerinti leválasztását az alábbi példák segítségével részletesen ismertetjük. 1 1. példa 1 g 7-(dimetil-amino-metilidén-amino)-9a-metoxi-mitozán szabad bázist 200 ml össztérfogathoz szükséges mennyiségű tercier-butanolban szuszpendálunk 2 órán át, tompított, szórt fényben, 26-32 °C-on. A kapott oldat 5 mg/ml 7- (dimetil-amino-metilidén-amino) -9a-metoxi-mitozánt tartalmaz. 4 5 Steril körülmények között ezt az oldatot nitrogén-nyomás alatt steril, 0,22 mikron pórusméretű Millipore szűrőn vezetjük át (alkohol-típusú oldószerek számára tervezett szűrőt alkalmazunk). A szűrletet steril edényben fogjuk fel. Ügyelünk arra, hogy az oldat hőmérséklete ne süllyedjen 26 °C alá, mivel a tercier-butanol 25 0 alatti hőmérsékleten kristályosodhat. Az oldatból 2-2 ml mennyiséget töltünk steril üvegampullákba. Az ampullákat részlegesen bedugaszoljuk elhasított, butil-kaucsuk liofilizáló dugókkal, majd tercier-butanol kondenzálására tervezett steril liofilizáló készülékbe helyezzük őket, és az ampullák tartalmát —40 °C-on megfagyasztjuk. A tercier-butanolt liofilizáljuk vagy szublimálással eltávolítjuk nagy vákuumban, 24-27 °C hőmérsékleten, 24 órán át. Ezután a hőmérsékletet 40-50 °C-ra emeljük 3-5 órai időtartamra, majd 24-27 °C értékre csökkentjük, és a vákuumot steril nitrogéngáz bevezetésével megszüntetjük. Az ampullákat steril alumíniumzárral lezárjuk. Mindegyik ampullában pelyhes, szivacsszerű, sötétzöld, főleg amorf, részben azonban kristályos anyag van jelen, amely legfeljebb 0,5 mólekvivalens mennyiségű tercier-butanolt tartalmaz. Az ampullákat sötétben tároljuk 20-26 °C-on. 2. példa 1 g 7-(dimetil-amino-metilidén-amino)-9a-metoxi-mitozán szabad bázist 100 ml össztérfogathoz szükséges mennyiségű tercier-butanolban szuszpendálunk 2 órán át, tompított, szórt fényben, 26-32 °C-on, a szilárd anyag feloldása céljából. Az így kapott oldat 1 ml térfogata 10 mg 7-(dimetil-amino-metilidén-amino) -9a-metoxi-mitozánt tartalmaz. Steril körülmények között, nitrogén-nyomás alkalmazásával az oldatot steril, 0,22 mikron pórusméretű Millipore szűrőn vezetjük át (alkohol-típusú oldószerek számára tervezett szűrőt alkalmazunk). A szűrletet steril edényben fogjuk fel. A szíriét 1-1 ml mennyiségét steril üvegampullákba töltjük, az ampullákat részlegesen bedugaszoljuk liofilizáláshoz használatos dugókkal, majd tercier-butanol eltávolítására vagy kondenzálására tervezett steril vákuum-szárítószekrénybe helyezzük az ampullákat. A hőmérsékletet 26-30 °C-ra állítjuk be, és hagyjuk, hogy az ampullák tartalma felmelegedjen erre a hőmérsékletre. Az ampullák feletti térben a vákuum nagyságát 2-3 óra alatt fokozatosan 24-27 higganyinch értékre növeljük, változtatható nagyságú vákuumot biztosító szerkezet alkalmazásával. A tercier-butanol közelítőleg 1 ml/öt óra sebességgel párolog el. A 7-(dimetil-amino-metilidén-amino) -9a-metoxi-mitozán kikristályosodik az oldatból, ahogy a koncentrációja növekszik az oldatban a tercier-butanol lassú elpárologtatása folytán. További 16-24 órán át tartjuk fenn a 25-27 higanyinch nagyságú vákuumot 26-30 °C-on, majd nagyobb, azaz 10-60 millitorr vákuumot alkal-6 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
