193838. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új fiziológiailag aktív vegyületek mikrobiológiai úton való előállítására
193838 nulátumok, tabletták és végbélkúpok formájában. A vegyületek beadásának módja lehet pl. parenterális, orális és rektális. A kiszerelési eljárásban bármilyen gyógyászati hordozót vagy más adalékanyagot lehet alkalmazni, amely nem hat a jelen találmány szerinti vegyületekre. A kiszerelésben jelen levő aktív hatóanyag mennyisége függ a kiszerelés formájától, de általában a 0,01% —100% (súly/súly), előnyösen 0,1 — 70% közti tartományban van. A kiszerelési eljárásokban bármilyen olyan kiszerelési segédanyagot lehet alkalmazni a szükségletnek megfelelően, amely nem hat a jelen találmány szerinti vegyületekre, ilyenek pl. a hordozók és más adalékanyagok, így stabilizáló, tartósitó és fájdalomcsillapító szerek. Az injekció formájú kiszerelés módszerét részletesen is leírjuk az alábbiakban. A jelen találmány szerinti vegyületeket és mannitot oldunk desztillált vízben, és az így létrejött keveréket injekciós fiolákba vagy ampullákba töltjük, vagy fagyasztva szárítjuk. Közvetlenül felhasználás előtt a fagyasztva szárított port fiziológiás sóoldattal vagy desztillált vízzel állítjuk helyre, injekciót képezve. A jelen találmány szerinti vegyületek dózisa olyan tényezőktől függ, mint a betegség súlyossága, de általában 0,01—2000 mg/nap, előnyösen 0.1 - 1000 mg/nap tartományban van felnőtteknél. A kiszerelésre tipikus példákat írunk le az alábbiakban. Injekciók 30 súlyrész Plipostatin B,-et feloldunk 970 rész tisztított vízben, és az így létrejött oldatot szűréssel sterilizáljuk Millipore GS-tipusü szűrőn át. A szurlet 2 ml-es adagjait 10 ml-es fiolákba osztjuk szét, és fagyasztva szárítjuk, hogy injekcióhoz alkalmas, fagyasztva szárított port nyerjünk. Granulátumok 50 súlyrész Plipastatin A, káliumsót, G00 rész laktózt, 330 rész kristályos cellulózt és 20 rész hidroxi-propil cellulózt alaposan összekeverünk, és az így létrejött keveréket Roller Compactor -t alkalmazva összepréseljük, granuláljuk, és a 16—60 mesh közötti részecskeméretű granulátumokat öszszegyűjtjük. Aktivitás A jelen találmány szerinti, új fiziológiailag aktív vegyületek, a Plipostatinok fiziológiai aktivitását az alábbiakban világítjuk meg. (1) Foszfolipáz-gátlás A foszfolipáz gátlásának mérését Okuyama és munkatársai módszerével hajtjuk végre, amint ezt fentebb bemutattuk. Az eredményeket a 3. Táblázat mutatja be. 13 8 14 3. TÁBLÁZAT A foszfolipáz gátlása A gátlás mértéke, IC50 /jUg/ml/ Plipostatin Foszfolipáz Ai a2 Bi b2 A2 4,3 3,4 5,2 3,5 C 1,9 4,0 3,6 4,& D 2,1 3,8 2,8 3,3 /2/ Immuno-szuppresszív aktivitás A jelen találmány szerinti Plipostatinok farmakológiai tanulmányozásának eredményeképpen úgy találjuk, hogy ennek a vegyületnek szuppresszív hatása van a sejtek által közvetített immunitásra. A jelen találmány szerinti mini Plipostatin A,, mind Plipostatin B, szuppresszív hatását a sejtek által közvetített immunitásra a következő kísérletekkel illusztráljuk. 1. kísérlet Ez a kísérlet a sejtek által közvetített immunitásra való hatásokat illusztrálja normál egerekben. A Plipostatin A, és B, aktivitásait a sejtek által közvetített immunitásra antigén birka vörösvérsejtekkel (SRBC) egy mancson végrehajtott inokulálás által előidézett késleltetett típusú hiperérzékenység (DTH) összefüggésében tanulmányozzuk [referencia: J. Exp. Med. 139, 1529—1539(1974)]. CDF, egereket (8 hetes nőstények) intravénásán inokulálunk 5-105 SRBC tartalmú fiziológiás sóoldat-szuszpenzióval. Ugyanakkor 5 mg/kg vagy 0,5 mg/kg Plipostatin A, vagy B, vizes oldatok egyedi adagját adjuk be intraperitoneálisan az egereknek. Négy nappal az injekció után az egereket másodlagos kihívásnak vetjük alá a másik mancs szubkután infekciójával, 108 SRBC-tartalmú fiziológiás sóoldat-szuszpenzióval. 24 órával később a mancs-duzzadás mértékét (a mancs vastagságának megnövekedését) mérjük tolómércével. A vizsgált vegyületeknek a sejtek által közvetített immunitásra való szuppresszív hatását úgy határozzuk meg, hogy összehasonlítjuk a mancs-duzzadás mértékét a kezelt állatokban a mancs-duzzadás mértékével (100%) a nem kezelt állatokban, amelyeket szubkután fiziológiás sóoldatban levő vizes SRBC oldattal injektáltunk mancsaikon a vizsgált vegyületek helyett. Az eredményeket a 4. Táblázat foglalja össze. 4. TÁBLÁZAT BMG 302-fF67 Adag A mancs Százalék a kontacil-peptidek /mg/kg/ vastagsága rollhoz /100Z/ 10 mm viszonyítva Ai 5 48 16 49 0,5 63 25 64 Bi 5 57 31 58 0,5 97 44 99 Kontroll ~ 98 43 100 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
