193835. lajstromszámú szabadalom • Mikrobiológiai eljárás szerves vegyületek előállítására
193835 Példaként bemutatunk egy csirketápszer-összetételt, amely a találmány szerinti hatóanyagot tartalmazza: 200 g búza, 340 g kukorica, 361 g szója hulladék, 60 g marhafaggyú, 15 g dikalcium-foszfát, 10 g kalcium-karbonát, 4 g jódozott konyhasó, 7,5 g vitamin-ásványianyag-keverék és 2,5 g hatóanyagtartalmú premix alaposan elkeverve 1 kg takarmányt ad. 1 kg takarmánykeverék a következő anyagokat tartalmazza: 600 NE A-vitamin, 100 NE D-vitamin, 10 mg E-vitamin, 1 mg K3-vitamin, 3 mg riboflavin, 2 mg piridoxin, 20 meg B12-vitamin, 5 mg ka 1 - cium-pantotenát, 30 mg nikotinsav, 200 mg kolin-klorid, 200 mg MnSO4-.H20, 140 mg ZnS04-7H20, 100 mg FeS04-7H20, 20 mg CuS04 5ft20. A hatóanyagtartalmú premix a hatóanyagot a kívánt mennyiségben tartalmazza, pl. 10 mg és 1 g DL-metionin, valamint annyi szójababliszt, hogy 2,5 g prémix keletkezzen. Példaként bemutatunk egy sertéstápszer-összetételt, amely a találmány szerinti hatóanyagot tartalmazza: 630 g takarmánygabona (összetétel: 200 g kukorica, 150 g árpa, 150 g zab, és 130 g búza hulladék), 80 g halliszt, 60 g szója hulladék, 60 g tapiokaliszt, 38 g sörélesztő, 50 g vitamin-ásványianyag-keverék sertéseknek (öszszetétel: pl. mint a csirketápszernél), 30 g lenmag-pogácsaliszt, 30 g kukorica sikér takarmány, 10 g szójaolaj, 10 g cukornádmelasz, 2 g hatóanyag-premix (összetétel pl. mint a csirketápszernél) alapos összekeveréssel 1 kg takarmányt ad. A megadott takarmánykeverékek a csirkék, illetve sertések felnevelésére és hizlalására összeállítva, ugyanilyen vagy hasonló összetételű takarmánykeverékek alkalmasak más állatok felnevelésére és hizlalására. Amint azt már említettük, nem feltétlenül szükséges a tisztított és izolált hatóanyagot alkalmazni. Fel lehet használni a hatóanyag előállításakor keletkező tenyészközeget tisztítás nélkül, adott esetben szárítva. Más célokra alkalmas például a találmány szerinti hatóanyag nyers formában, finom tisztítás nélkül. A találmány szerinti új hatóanyagok előállítását a következő példákkal szemléltetjük. 1. példa A Streptomyces sp. BA 9 termelő törzs tenyésztésére használt tápközeg összetétele a következő: 3% zsírtalanított szójaliszt, 3% glicerin (87%-os), 0,2% CaCOa csapvízben oldva. A tápoldatot 121°C-on 40 percig sterilizáljuk. Egy 1000 ml-es Erlenmeyer lombikot, amely a fenti oldatból 150 ml-t tartalmaz, a termelő törzzsel beoltjuk, és 5 napig 28°C-on 280 ford/perc sebességű rázóasztalon inkubáljuk. Az így kapott előtenyészettel beoltunk egy 40 1-es fermentort, amely 20 1 fenti tápoldatot, 0,05% szilikonnal kiegészítve, tartalmaz, és 200 ford/perc sebességgel kever-11 ve (lapkeverő), 10 l/perc sebességgel levegőztetve, 1,0- 105 Pa nyomáson, 28°C-on 2 napig inkubáljuk. Ezzel az előfermentorral beoltjuk a 600 1-es termelő fermentort, amely 400 1 fenti tápoldatot és 0,03% szilikont tartalmaz. A termelő fermentort 65 óra hoszszat, 28°C-on, 1,0- 105 bar túlnyomáson, 60 ford/perc sebességgel keverve (lapátkeverő) és 160 l/perc sebességgel levegőztetve inkubáljuk. 2. példa Az 1. példa szerint kapott tenyészközeget (400 1) egy 200-250 1 /óra teljesítményű Westfalia-szeparátorral elválasztjuk. Az elválasztott anyagot egy 50 1-es, Lewatit OC 1031 (Bayer) töltettel ellátott, 30 cm átmérőjű oszlopon vezetjük át. Egymás után 500 1 ionmentesített vízzel, 300 1 30%-os vizes metanollal mossuk, és 300 I metanollal deszorbeáljuk. A deszorbeált anyagot csökkentett nyomáson szárazra pároljuk, 20 1 vízzel szuszpendáljuk, és fagyasztva szárítjuk, így 137 g nyers, találmány szerinti vegyületet kapunk (hatóanyagtartalma 1,5%). 3. példa A találmány szerinti vegyület előállítása tisztán, gélszűréssel és kromatográfiával szilikagélen 50 g, 2. példa szerint kapott nyers terméket 2 1 vízben szuszpendálunk, és a pH-t koncentrált ecetsavval 5,0-ra állítjuk. Ezt a szuszpenziót választótölcsérben kétszer 2 1 etil-acetát/etanol 9:1 térfogatarányú eleggyel extraháljuk. Az egyesített szerves fázisokat csökkentett nyomáson szárazra pároljuk, 100 ml metanolban oldjuk, és Sephadex LH 20* -en metanolban gélszűrjük. 7,5 cm átmérőjű és 1,25 m hosszú oszlopot használunk. Az átfolyási arány 720 ml/óra. 200 ml-es frakciókat gyűjtünk. Az antibiográfiában Staphylococcus aureus 1756 ellen hatásos frakciókat egyesítjük, csökkentett nyomáson betöményítjük, vízben szuszpendáljuk, és fagyasztva szárítjuk. Kitermelés: 2,94 g, 26%-os termék. 600 mg így kapott anyagot feloldunk 100 ml kloroformban 60 pl koncentrált ecetsav adagolása mellett. Egy LiChropre 60 töltetű (40-63 pm, Merck, B típus) LobarR oszlopot 0,1 térfogat% koncentrált ecetsavat tartalmazó kloroformmal kiegyenlítünk, és erre felviszszük az oldatot. 400 ml fenti oldószereleggyel végzett eluálás után az anyagot kloroform (metanol)ecetsav 98:2:0,1 térfogatarányú elegyével eluáljuk. Az átfolyási sebesség 400 ml/ ,/óra. 10 ml-es frakciókat gyűjtünk. Ezeket vékonyréteg-kromatográfiával sziiikagél lapokon (Merck 5729) analizáljuk. A biológiailag aktív, FeCl3/H2S04 reagenssel megszínezhető, egynemű frakciókat szárazra pároljuk, kevés vízzel szuszpendáljuk, és fagyasztva szárítjuk. Kitermelés: 76,2 mg, 98%-os tisztaság. 12 7 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
