193744. lajstromszámú szabadalom • Mikrobiológiai eljárás l-karnitin előállítására
193744 végzett kromatográfiával elkülönítettük az oldatból, majd átkristályosítással tisztítottuk. 4. példa A HK 13 jelű törzs 5 literes előkultúráját 1 t% kolint és 0,6 t% gamma-butiro-betain-hidrokloridot tartalmazó, vitamintartalmú ásványi közegben (az 1. példa szerinti) 30°C- on pH 7,0 mellett 32 órán át tenyésztettük. A tenyészettel 15 liter térfogatú, azonos összetételű közeget oltottunk be. A kultúrát az 1. példában megadott módon tenyésztettük. Mintegy 30 óra elteltével a termelés megállt. A sejteket mikroszűréssel (Amicon Hollow-fiber cartridge) eltávolítottuk. A sejtmasszával további termelő kultúrát oltottunk be. A 19,6 liter térfogatú szűrlet L-karnitin-koncentrációja 5,3 mg/ml volt, ami a gamma-butiro-betain kiindulási mennyiségére vonatkoztatva 97,6 %-os hozamnak felel meg. Az NMR-színkép sem kiindulási anyagot, sem szennyeződéseket nem mutatott ki. Ezért az L-karnitint ismert módon, például azeotrop deszti 11 álássa 1 (23 00 492 sz. NSZK-beli szabadalmi leírás) különíthettük el az oldatból. 5. példa Folyamatos fermentálásra alkalmas, 1,5 liter vitamintartalmú (1. példa szerinti), 1,5 t% betaint és 1,0 t% gamma-butiro-betain-hidrokloridot tartalmazó ásványi tápközeget tartalmazó fermentort a HK 13 törzs azonos közegben készített előkultúrájának 150 ml-jével oltottunk. 20 órán át 30°C-on, pH 7,0 és aerob körülmények mellett végzett tenyésztés után a kultúra kinőtt, és 0,1 l/óra átfolyási sebességgel kezdtük a folyamatos üzemet. A fermentorból kilépő oldatot 4°C-ra hűtött edénybe szedtük, a sejteket centrifugálással elválasztottuk. Az enzimes elemzés szerint a szűrlet L-karnitin-koncentrációja 8,8 g/1 volt. Ez az érték a gamma-butiro-betain kiindulási mennyiségére vonatkoztatva 99,2 %-os hozamnak felel meg. Az oldatból ionos kromatográfiával és vízelválasztással különítettük el a szilárd L-karnitin-hidrokloridot. SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás L-karnitin előállítására, azzal jellemezve, hogy a HK 13 jelű, DSM 2903 szám alatt letétbe helyezett mikroorganizmust vagy mutánsait krotono-betainnal és/vagy gamma-butiro-betainnal dimetil-glicin, kolin, glutamát, acetát és/vagy bétáin jelenlétében tenyésztjük, majd a feldúsúlt L-karnitint elkülönítjük. (1984.03.29.) 9 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a krotono-betaint, gamma-butiro-betaint vagy a kettő keverékét 0,1- -10 t% mennyiségben adagoljuk a tápközeg-5 hez. (1984.03.29.) 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a dimetil-glicint, kolint, glutamátot, acetátot és/vagy betaint a tápközeg mennyiségére vonatkoztatva 0,1-10 -10 t% mennyiségben adagoljuk. (1984.03.29.) 4. Eljárás L-karnitin előállítására, azzal jellemezve, hogy a HK 13 jelű, DSM 2903 szám alatt letétbe helyezett, vagy a HK 1331 b 15 jelű, DSM 3225 szám alatt letétbe helyezett mikroorganizmust vagy mutánsait krotono-betainnal és/vagy gamma-butiro-betainnal dimetil-glicin, kolin, glutamát, acetát és/vagy bétáin jelenlétében tenyésztjük, majd a fel -20 dúsúlt L-karnitint elkülönítjük. (1985.03.19.) 5. A 4. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a krotono-betaint, gamma-butiro-betaint vagy a kettő keverékét 0,1- -10 t% mennyiségben adagoljuk a tápközeg-25 hez. (1985.03.19.) 6. A 4. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a dimetil-glicint, kolint, glutamátot, acetátot és/vagy betaint a tápközeg mennyiségére vonatkoztatva 0,1-10 t% meny-30 nyiségben adagoljuk. (1985.03.19.) 7. Eljárás az 1—6. igénypontok bármelyike szerinti eljárásban alkalmazható mikroorganizmusok előállítására, azzal jellemezve, hogy 35 a) C- és N-forrásként betaint, gamma-butiro-betaint, krotono-betaint és L-karnitint hasznosítani képes mikroorganizmusokat mutagén kezelésnek vetünk alá, majd b) a mutagén kezelés után tenyésztéssel 40 kapott kultúrából a stabil, L-karnitint nem katabolizáló, L-karnitin, krotono-betain, gamma-butiro-betain hasznosítására képtelen, de betaint hasznosító mikroorganizmusokat szelektáljuk. (1984.03.29.) 45 8. A 7. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a b) lépésben az L-karnitin, krotono-betain és gamma-butiro-betain hasznosítására képtelen, de betaint hasznosító, emellett L-karnitint kiválasztó mikroorga-50 nizmusokat szelektáljuk. (1984.03.29.) 9. A 7. vagy 8. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az a) lépésben mutagén kezelésnek alávetett mikroorganizmust betain-tartalmú közegben tenyésztjük tovább. 55 (1983.03.29.) 10 Rajz nélkül Kiadja: Országos Találmányi Hivatal, Budapest A kiadásért felel: Hiner Zoltán osztályvezető 4763. Nyomdaipari vállalat, Ungvár
