193737. lajstromszámú szabadalom • Eljárás transzferrin-indol-dihidroindol alkaloid-származékok előállítására
193737 alkaloid citotoxikus szert tartalmaz, egy vagy több gyógyszerészetileg elfogadható hordozó- vagy vivőanyaggal együtt. A találmány szerinti vegyületek parenterális vagy intraperitoneáiis alkalmazásakor injektálásra alkalmas gyógyszerészeti formákat állítunk elő, melyek steril vizes oldatokból vagy diszperziókból és steril porokból állnak; ezekből steril, injektálható oldatok vagy diszperziók készíthetők. Hordozóként oldószert vagy diszpergáló közeget használhatunk, amely például vizet, etanolt, polialkoholt (például glicerin, propilén-glikoí, polietilén-glikol és hasonlók), ezek alkalmas keverékeit és növényi olajokat tartalmaz. Megfelelő fluiditás tartható fenn például lecitin használata útján, diszperzió esetén a kívánt részecskeméret megtartása útján és felületaktív szerek alkalmazásával. A mikroorganizmusok hatása különböző baktérium- és gombaellenes szerekkel, például parabénekkel, klór-butanollal, fenollal, szorbinsavval és hasonlókkal gátolható meg. Sok esetben kívánatos lehet izotóniás anyagokat, például cukrot, nátrium-kloridot és hasonlókat alkalmazni a készítményben. Az injektálható gyógyszerforma lassú felszívódása felszívódást késleltető anyagok, például alumínium-monosztearát és zselatin alkalmazásával biztosítható. Steril, injektálható oldatok előállítása céljából a találmány szerinti vegyületeketszükséges mennyiségű, alkalmas oldószerben oldjuk, amely kívánt esetben különféle egyéb adalékokat tartalmaz. Kívánt esetben és a hatásosabb eloszlás érdekében az I általános képletű vegyületek lassan felszabaduló rendszerekbe, mint polimer mátrixokba, liposzómákba és mikrogömböcskékbe építhetők be. Ezenfelül a találmány szerinti készítmények vagy egyedül, vagy számos hatóanyag keverékeként alkalmazhatók. A találmány szerinti készítmények dózisait a kívánt terápiás hatás eléréséhez szükséges ideig alkalmazzuk. A beteg testsúlya és a készítmény alkalmazási módja befolyásolja és szabja meg a sajátos hatás kifejtéséhez szükséges dózis nagyságát. Különösen előnyös a találmány szerinti vegyületeket egységdózis formára feldolgozni a kényelmes alkalmazás és az egyenletes adagolás érdekében. Egységdózis forma alatt fizikailag elkülönülő egységeket értünk, melyek egyedi dózisokként adhatók be a betegnek. Minden egység a kívánt terápiás hatás kifejtéséhez számított, előre meghatározott mennyiségű hatóanyagot tartalmaz gyógyszerészetileg elfogadható hordozóanyaggal együtt. Az adott egységdózis formát (a) az illető hatóanyag egyedi jellegzetességei és (b) az elérendő sajátos gyógyhatás szabják meg. A találmány hatókörét nem kolátozó következő példák a találmány további ismertetésére szolgálnak. 5 4 A találmány hatókörét nem korlátozó következő példák a találmány további ismertetésére szolgálnak. 1. példa Humán transzferrin és 4-dezacetil-vinblasztin-szukcinát-monoészter konjugátjának előállítása Borostyánkősav 4-dezacetil-vinblasztin-monoészterét (300 mg) 6 ml metilén-kloridban ol.djuk, és hozzáadunk 50 pl N-metil-morfolint (NMM). Az elegyet keverjük és jeges fürdőben lehűtjük 0°C-ra. Izobutil-klór-formiátot (50 pl) adunk hozzá és az elegyet 0°C-on körülbelül 15 percig keverjük. N-hidroxi-szukcinimidet (50 mg) adunk hozzá, és a keveréket forró vízfürdőn mintegy 20 percig melegítjük. A reakcióelegyet bepárolva sárgásbarna maradékot kapunk. 1 g humán transzferrint körülbelül 20 ml vízben oldunk. Az előzőekben előállított maradékot feloldjuk körülbelül 3 ml dioxánban és a kapott oldatot hozzáadjuk a transzferrinoldathoz. A transzferrinoldat pH-ját (körülbelül 8,5) a vinkaoldat rriintegy 6,5-re csökkenti és zavaros keverék képződik. A reakcióelegyet keverjük, majd 0,5n nátrium-hidroxid-oldat hozzáadásával a pH-t 9,0-re állítjuk be, utána 10 ml vizet adunk hozzá. A reakciókeverék körülbelül 20 perc keverés után feltisztul. A keverést szobahőmérsékleten mintegy 2 óráig folytatjuk (végső pH 7,4). Ezután a keveréket dializáló zacskóba töltjük, melynek visszatartási molekulasúlyhatára 12000—14000. A dialízist hűtés közben 1 liter vízzel szemben 9 napig folytatjuk, miközben a vizet naponta cseréljük. A terméket fagyasztva, szárítással kinyerve 750 mg konjugátumot kapunk, melyben az alkaloid transzferrin átlagos mólaránya 20:1. 2. példa Humán transzferrin és vindezin-szukcinát-monoészter konjugátjának előállítása Humán transzferrin (100 mg) 13 ml 0,34 M borát-pufferben oldunk. A kapott keverék pH-ja 8,6. 4-szukcinil-vindezint — melyet N-hidroxi-szukcinimiddel (12,4 g) reagáltatva aktiváltuk — 0,2 ml vízmentes N,N-dimetil-formamidban oldunk, és az oldatot keverés közben a humán transzferrinoldathoz adjuk. A keverék zavaros lesz és pH-ja nem, vagy csak kissé változik. A pH-t 0,ln sósavoldattal 6,0-ra csökkentjük. A kapott áttetsző oldatot szobahőmérsékleten körülbelül 2 óráig keverjük (végső pH 6,1). Az enyhén zavaros keveréket dializáló zacskóba töltjük (viszszatartási molekulasúlyhatár 12000—14000). A dialízist hűtés közben 500 ml ionmentesített vízzel szemben körülbelül 7 napig folytatjuk, közben a vizet naponta cseréljük. A keveréket fagyasztva szárítjuk és így 67 mg konjugátot kapunk. 6 5 10 15 2C 25 30 35 40 45 50 55 60 65
