193607. lajstromszámú szabadalom • Eljárás természetes vagy mesterséges megtermékenyítésre alkalmas ivartermékek előállítására emlős állatokban
193607 injektálás között két óra idő szünetet tartottunk; az első dózis 100 pg, a második 500 pg volt. Ezt 48 óra múlva követte a harmadik dózis (100 pg), majd 2 óra múlva a negyedik, 500 pg-os dózis. A kezelés 0., 2., 4. és 8. napján a hasüreget narkózisban felnyitottuk, a petefészkek állapotának változását vizuálisan értékeltük. A kezelések befejeztével mindkét petefészket kioperáltuk, rögzítettük, és elvégeztük szövettani kiértékelésüket. A kezelés 0. napján mindkét állat esetében a bal oldali petefészken 3—4 feltételezett szekunder tüsző, 1 db visszafejlődött régi sárgatest, a jobb oldali petefészken 5—6 db feltételezett szekunder tüsző volt látható. A kezelés hatására 4 nap után valamennyi szekunder tüsző Gráf-tüszővé fejlődött, leovulált, és a helyükön corpus luteummá alakuló corpus haemorrhagicum-ok voltak. A corpus haemorrhagicum-ok mellett vizuálisan nem számolható mennyiségű szekunder tüsző növekedett, amelyek a következő kezelések hatására továbbfejlődtek, és az utolsó 500 pg-os dózis hatására intrafollikuláris luteinizációval atretizáltak. A szövettani értékelés a vizuálisan tapasztaltakat teljes mértékben alátámasztotta. A fenti kezelés hatására létrejött ovuláció azt bizonyítja, hogy macskafélék esetében szezonon kívül is létrehozható megtermékenyítés, és nem természetszerű tartásban is nyerhetünk utódokat. 17. példa Szezonális anösztruszban lévő nőstény kékróka kezelése fertilis ösztrusz kiváltása céljából Szezonális anösztruszban lévő nőstény kékrókát december hónapban narkózisban laparoszkópiával vizsgáltunk. Megállapítottuk, hogy mindkét oldali petefészek inaktív, azokon fejlődő tüszők vagy Gráf-tüszők nem láthatók. Ezután az állatot napi két alkalommal 1—5 pg dózisú D-Phe6, Gin8—GnRH analóggal kezeltük 10 napon át intramuszkulárisan. A 10. napon, narkózisban újabb laparoszkópiát végeztünk. Megállapítottuk, hogy mindkét oldali petefészken nagy corpus luteumok vannak, amelyek számát — a technika tökéletlensége miatt — csak becsülni tudtuk, kb. 10—20 db volt. Ezzel egyidőben megállapítottuk, hogy a méhnyak nyitott. Szintén december hónapban, mammális sorvadás miatt selejtezésre ítélt nőstényt hasonló módon napi két alkalommal 2—2 pg dózisú D-Phe6, Gin8—GnRH analóggal kezeltünk, aminek a hatását a méhnyak állapotának változásával követtük. Az első kezelést követő 6. napon a méhnyak felnyílt. Ekkor 50 pg dózisú hatóanyaggal kezeltük. 16 óra elteltével a petefészkek állapotát tükrözéssel vizsgáltuk, és közvetlenül ovuláció előtti állapotot regisztráltunk. Ezek után a hasüreget teljesen felnyitottuk, a petefészkeket kioperáltuk és az összesen 11 db Gráf-tüszőből punkcióval eltávolítottuk a petesejteket. 6 db 13 8 szabályos corona radiataval borított normális petesejtet találtunk. A fenti eljárással szezonális anösztruszban, az évi rendes ivarzást nem zavarva, lehetővé tettük in vitro termékenyítésre alkalmas petesejtek, embriók előállítását. Így lehetőségünk nyílik különleges hibrid ivadékok előállítására kevésbé értékes recipiens állatok felhasználásával. 18. példa Infantilis házimacska (Felis cattus domesticus) petefészek-működésének stimulálása D-Phe6, Gln8-GnRH analóggal 5db egyenként 0.3 kg súlyú, 45-életnapos mat skakölyköt D-Phe6, Gin8—GnRH analóggal 2-naponkénti gyakorisággal, összesen 4 alkalommal, esetenként 100—100 pg dózisú anyaggal kezeltünk. A hatóanyagot fiziológiás sóoldatban, intramuszkulárisan adagoltuk A kezelés után az állatok mindkét oldali petefészkét narkózisban kioperáltuk és vizuálisan értékeltük. Ezt követően formaiinban rögzítettük, majd szövettani vizsgálatot végeztünk. Megállapítottuk, hogy mindkét oldali petefészken 5—7 corpus haemorrhagicum található. A kéreg alatt a világos, vajszínű petefészektől jól elváló fejlődő tüszőket találturk, amelyekből néhány Gráf-tüsző méretű volt. Hatóanyaggal nem kezelt állatoknál ezek a változások nem történtek meg. Ezek az eredmények egyértelműen azt bizonyítják, hogy az infantilis házimacska petefészke a fenti eljárás hatására az ivarérett állatra jellemző szövettani és morfológiai sajátosságokat mutatja, így az állat a hagyományos értelemben vett biológiai ivarérettség elett alkalmassá válik in vitro termékenyítésre alkalmas petesejtek előállítására. 19. példa Infantilis házimacska petefészek-működésének stimulálása D-Phe6, Trp7, Leu8— GnRH analóggal 5 db egyenként 0,3 kg súlyú, 45-életnapos m.icskakölyköt D-Phe6, Trp7, Leu8-GnRH analóggal kezeltünk úgy, hogy narkózisban a baloldali petefészket a kezelések megkezdése előtt kioperáltuk, majd a médiumokat kétnrponkénti gyakorisággal, összesen 3 alkalommal, esetenként 100—100 pg dózisú, fiziológiás NaCI-ban oldott hatóanyaggal intramuszkulárisan kezeltük. A kezelés után a megmaradt (jobb oldali) petefészkeket kioperáltuk, vizuálisan értékeltük, majd fixálás ulán szövettani vizsgálatot végeztünk. A kezelés előtt kioperált petefészkek teljesen homogének, vajsárga színűek voltak, bennük fejlődő tüszőt sem vizuálisan, sem szövette nilag nem lehetett észlelni. A kezelés után a petefészkeken 7—8 db corpus haemorrhag cum-ot és sok (nem számolható) fejlődő tüszőt találtunk. A kísérlet eredménye másik hatóanyag analóg alkalmazása esetében is teljes mértekben alátámasztotta a 18. példában ismertetett eredményeket, és további tapasztalato-14 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
