193585. lajstromszámú szabadalom • Eljárás mikroorganizmusok és makroorganizmusok sejtkultúráinak tenyésztésére alkalmas szilárd táptalajok előállítására
193585 A vizsgálat során megakaryocita sejteket is megfigyelhetük. Ezek az óriás sejtek szférikus formájúak.és néha a citoplazmamembrán felületén boltozatos kialakításúak. Trom bocitaképződést nem tapasztalható. 8. példa Az A és C oldatot az 1. példában, a B oldatot a 4. példában leírtak szerint állítjuk elő. A reakciókeverék az akrilamid és N,N’-metilén-bisz-akrilamid monomereket 10,0:0,132 tömegarányban tartalmazza, és a keverék fiziológiás oldathoz viszonyított tömegaránya l : 5. A reakciókeveréket egy reaktorba öntjük, és a képződő poliakrilamid-gélből két lapos csíkot alakítunk ki, amely közül az egyik 150 x 80 x 12 mm, a másik 150 x 80 x 2,5 mm méretű, és ez utóbbin 5 x 1,3 mm-es üregeket képezünk ki egymástól 1,8 mm távolságra, koaxiális elrendezésben. A kopolimerizációt 40 percig végezzük. A poliakrilamid alapú csíkokat ezután a kiindulási monomerkeveréknek megfelelő keverékkel átitatjuk, és oly módon helyezzük el egymáson, hogy zárt üregek alakuljanak ki, majd 50 percig, amíg egységes blokk nem képződik, így tartjuk, és ekkor úgy osztjuk részekre, hogy mindegyik egy-egy zárt üreget tartalmazzon. Az így nyert diffúziós kamrákat fiziológiás oldatban tömegük 3,2-szeresére duzzasztjuk, majd sterilizáljuk és Hanks-oldattal átitatjuk. Egészséges emberi leukocyták tenyésztése céljából leukocyta populációt helyezünk a diffúziós kamra üregeibe, amely 1 x 106 menynyiségben tartalmazza a fehér vérsejtek minden formáját, Hanks-oldatban szuszpendálva. Ezután a diffúziós kamrákat xenogén állatok (keverék, nem fajtiszta) szervébe implantáljuk, majd a kívánt megfigyelési idő letelte után kivesszük. A kísérletek kiértékelésénél megállapítottuk, hogy a lymphociták a 20 nap alatt fennmaradtak, bár mennyiségük 79%ról 20%-ra csökkent. A neutrophylek és monocyták is életképesek maradtak, legalábbis az első 2-3 napon. A makrofágok mennyisége a második napon 15%-ra, a huszadik napon 50% ra növekedett. A nyolcadik napon a kultúrában csírák, fibróblast-szerü és átmeneti sejtek jelentek meg. SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás mikroorganizmusok és makroorganizmusok sejtkultúráinak tenyésztésére 15 alkalmas,szilárd táptalaj előállítására akrilamid és N,N’-metilén-bisz-akri!amid fiziológiás oldatban, gyökös iniciátor jelenlétében végzett kopolimerizációjával, majd a kapott 5 poliakrilamid-gél fiziológiás oldattal való átmosásával, azzal jellemezve, hogy (15,0— —20,0) : (0,019—0,132) tömegarányú akrilamid-N,N’-metilén-bisz-akrilamid monomerkeveréket kopolimerizálunk, valamely fizio- 10 logiás oldattal mossuk,és a kimosás után kiváló poliakrilamid-gélt. a) a fiziológiás oldattal duzzasztjuk, amíg tömege 2,8—4,5-szörösére növekszik, majd valamely folyékony tápközeggel kezeljük. 15 vagy b) valamely folyékony tápközeggel duzzasztjuk, amíg tömege 2,5—3,5-szörösére növekszik. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal 20 jellemezve, hogy a kopolimerizációnál az akrilamid- N,N’-metilén-bisz-akrilamid monomerkeveréket a fiziológiás oldathoz viszonyítva 1:4 és 1:7 tömegarány közötti mennyiségben alkalmazzuk. 25 3. Az 1—2. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy fiziológiás oldatként 0,85%-os vizes nátrium-kloridot, Ringer-Locke-, Earl-, Hanks- vagy 5%-os glükóz oldatot alkalmazunk. 30 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy folyékony tápközegként Hottinger-féle tripszin-emésztési-oldatot, Marten-húsleves-, pepton-víz-táptalajt, kazeinhidrolizátumot, sókeveréket vagy 199-es közeget 35 alkalmazunk. 5. Az 1—3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a poliakrilamid-gél duzzasztására inaktivált emberi vérszérum és plazmol 1:1 arányú keverékét 40 alkalmazzuk folyékony tápközegként. 6. Az 1—3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a kopolimerizáció során a poliakrilamid-gélt két lapos csíkká alakítjuk, amelyek közül az egyiken 45 koaxiális és/vagy sakktábla-szerű elrendezésbe üregeket alakítunk ki, majd a csíkokat 15,0—20,0 : 0,019—0,132 tömegarányú akrilamid-N,N’-metilén-bisz-akrilamid monomerkeverékkel átitatjuk, és egymásra helyezzük 50 úgy, hogy zárt üregeket alakítunk ki, majd ezekből egységes blokkot képezünk, majd ezeket legalább egy zárt üreget tartalmazó darabokra osztjuk. 16 Rajz nélkül Kiadja: Országos Találmányi Hivatal, Budapest A kiadásért felel: Himer Zoltán osztályvezető N° 3344. Nyomdaipari vállalat, Ungvár
