193579. lajstromszámú szabadalom • Eljárás leucin-származék és az ebből képzett gyógyszerkészítmény előállítására
ták, bevonatos tabletták, drazsék, kemény- és lágy-zselatinkapszulák, oldatok, emulziók vagy szuszpenziók). A gyógyászati készítményeket oly módon állíthatjuk elő, hogy az (I) képletű tetrahidrolipsztatint mint hatóanyagot szervetlen vágyszerves gyógyászati hordozóanyagokkal öszszekeverjük. A tabletták, bevonatos tabletták, drazsék és kemény-zselatinkapszulák készítése során hordozóanyagként pl. laktózt, kukoricakeményítőt és származékait, talkumot, sztearinsavat és sóit alkalmazhatjuk. A lágy-zselatinkapszulák készítésénél hordozóanyagként pl növényi olajokat, viaszokat, zsírokat, féligszilárd vagy folyékony poliolokat stb. használhatunk. A lágy-zselatinkapszulák azonban a hatóanyag tulajdonságaitól függően bizonyos esetekben hordozóanyagot egyáltalán nem tartalmaznak. Az oldatok és szirupok készítése során hordozóanyagként pl. vizet, poliolokat, szacharózt, invertcukrot, glükózt stb. alkalmazhatunk. A gyógyászati készítmények további konzerváló-, oldásközvetítő-, stabilizáló-, nedvesítő-, emulgeáló, édesítőszereket, színezőanyagokat, aromaanyagokat, az ozmózisnyomás változását előidéző sókat, puffereket, bevonatanyagokat vagy antioxidánsokat, továbbá gyógyászatilag értékes más anyagokat is tartalmaznak. A gyógyászati készítményeket oly módon állíthatjuk elő, hogy az (1) képletű vegyületet és adott esetben egy vagy több gyógyászatilag értékes anyagokat inert hordozóanyagokkal összekeverünk és galenikus formára hozunk. Az (I) képletű vegyületet tartalmazó gyógyászati készítményeket — mint már említettük — betegségek kezelésére vagy megelőzésére, különösen elhízás és hiperlipémia kezelésére vagy megelőzésére alkalmazhatjuk. Az (I) képletű tetrahidro-lipsztatin dozirozása tág határokon belül változhat és természetesen az adott eset körülményeitől függ. Orális adagolás mellett a napi dózis általában kb. 0,1 mg/kg testsúly és kb. 100 mg/kg testsúly közötti érték. Az (I) képletű vegyületet iparilag kezelt élelmiszerekhez — különösen zsírokhoz, olajokhoz, vajhoz, margarinhoz, csokoládéhoz és más élvezeti cikkekhez — is adhatjuk. Eljárásunk további részleteit az alábbi példákban ismertetjük anélkül, hogy találmányunkat a példákra korlátoznánk. 1. példa A/ Lipsztatin előállítása a) Fermentáció Rázólombikban levő 391 sz. előtápközeget a Streptomyces toxytricini 85—13 (vagy vegetatív micéliuma) spóráival beoltunk,és 28°C- on 72 órán át rázatott tenyészetben aerob körülmények között tenyésztünk. A tenyészet kb. 2—5 térfogat %-ával 10 liter 391 sz. előtenyészetet beoltunk. Ezután 3 napon át 5 28°C-on inkubáljuk, miközben 1 térf./térf. levegővel levegőztetjük és percenként 400 fordulat mellett keverjük. A kapott 10 liter előtenyészetet használjuk fel 200 literes termelő fermentorban levő N 7 termelő táptalaj beoltására. A fermentálást 28°C-on 124 órán át végezzük, 1,0 térf./térf. levegő levegőztetés és percenkénti 150 fordulatszámú keverés mellett. A rendszeres elemzés szerint 124 óra elteltével az extracelluláris lipizgátló aktivitás 53 IC50/ml. A 391 sz. előtápközeg (pH=7,0) összetétele a következő: 3% kukoricakeményítő, 4% dextrin, 3% szójaliszt, 0,2% ammónium-szulfát, 0,6% kalcium-karbonát és 0,8% szójaolaj. A pH-t 7-re állítjuk be. A termelő tápközeg (N 7; pH=7j összetétele a következő: 1% burgonyakeményítő, 0,5% glükóz, 1 % ribóz, 0,5% glicerin, 0,2% pepton, 2% szójaliszt és 0,2% ammónium-szulfát. b) Feldolgozás A fermentlevet centrifugálócsőben centrifugáljuk; ekkor 175 liter fermentlé-szürletet és 12 kg micéliumot kapunk. A micéliumot elöntjük, és a fermentlé-szürletet 10 percen át 80°C-on keverjük, majd lehűtjük, ismét centrifugáljuk és vákuumban 30°C-on 50 literre bepároljuk. A koncentrátumot folyamatosan működő extraktorban 50 liter hexánnal extraháljuk, a kapott emulziót 50 liter 1:1 arányú hexán-etilacetát eleggyel összekeverjük és a szerves fázist elválasztjuk. A szerves fázist nátrium-szulfát felett szárítjuk és bepá'oljuk. 199 g I. nyersextraktumot kapunk. A vizes fázist vízzel 100 literre hígítjuk és 100 liter etil-acetáttal extraháljuk. Az etil-acetáto oldat bepárlása után 49 g II. nyers-extraktumot kapunk. A vizes fázist 100 liter etil-acetáttal ismét extraháljuk, az extraktum bepárlása révén 78 g III. nyers-extraktumot kapunk. c) Tisztítás A II. és III. nyers-extraktumot három részletben 1 — 1 kg kovasavgél 60-on (szemcsenagyság 0,040—0,063 mm), átszűrjük és kloroformmal eluáljuk (az oszlop mérete lOx xlOO cm). Ily módon 18,3 g dúsított anyagot nyerünk. 178 g ily módon kapott dúsított anyagot 1 kg kovasavgelen átszűrünk és kloroformmal eluáljuk. 5,29 g aktív anyagot kapunk. 802 mg ily módon kapott aktív anyagot fordított fázisú kromatográíiával kereskedelmi forgalomban levő Lobar-kész-oszlopon (Lichoprep RP-8, C nagyság; gyártó cég: E.Merck AG.) metanolos eluálással tisztítjuk. 158 mg (2S,3S,5S,7Z,10Z)-5-[(S)-2-formamido-4- -metil-valeriloxi] -2-hexil-3-hidroxi-7,l 0-hexadekadiénsav-laktont (lipsztatin) kapunk, szobahőmérsékleten, sárga olaj alakjában. A termék alacsony hőmérsékleten viaszszerű, kristályos anyag. Mikroanalízis (finomvákuumban 50°C-on végzett 20 órás szárítás) C29H49N,05 (491,713) képletre számított: C%=70,84; H% = 10,04; N%=2,85 talált: C% =70,85; H%= 9,97; N%=2,59 6 193579 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
