193569. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új tri- és tetrapeptidek és ilyeneket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
193569 (D) BOC-Tyr-D-Arg-Gly-N( Et)CH2-CH2- -C6H4-4-N02 előállítása 1,97 g BOC-Tyr-D-Arg-HCl-t 20 ml DMF- ben oldunk és hozzáadunk 1,13 g HOBT-t, majd az oldatot lehűtjük —10°C-ra és 0,86 g DCCl-t adagolunk hozzá. Ezután a reakciókeveréket —5°C hőmérsékleten tartjuk 30 percig, majd hozzáadjuk 1,2 g Gly-N(Et)CH2CFI2-CgH4-N02.HCl-ot és 0,42 g NMM-t 5 ml DMF-ban oldva, majd a kapott keveréket 5°C-on 72 órán át keverjük. Ezután a diciklohexil-karbamidot szűréssel elválasztjuk, a szőrletet vákuumban betöményítjük, a maradékot 150 ml etil-acetát és 25 ml víz között megosztjuk, a szerves fázist ötször vízzel extraháljuk, a vizes fázisokat egyesítjük és háromszor 200—200 ml 5:1 arányú etil-acetát/n-butanol eleggyel kirázzuk. Az etil-acetát/n-butanol-os extraktumokat egyesítjük, háromszor 150 ml 5%-os Na2COa oldattal, kétszer 100 ml 5%-os citromsav oldattal és kétszer 100 ml vízzel mossuk, vákuumban betöményítjük, majd vízből és kétszer etanolból szárazra pároljuk. A végső maradékot éterrel elkeverjük. Tic.: a fő folt reagál a Pauly reagenssel (tyrosin) és a Sakaguchi reagenssel (arginin). (E) H-Tyr-D-Arg-Gly-N-(Et)CH2.CH2-C6H4- -4-N02.diacetát előállítása 1,9 g védett tripeptidet 15 ml jégecet és 7,5 ml anizol keverékében oldunk, majd szobahőmérsékleten 30 percig 22,5 ml 2 mólos HCI/ecetsav oldattal kezeljük, majd vákuumban betöményítjük, a maradékot éterrel elkeverjük, a kapott nyers terméket 20 ml vízbe oldjuk, majd vízzel és kétszer éterrel mossuk az anizol-maradék eltávolítására. A vizes fázist 5x50 cm-es karboxi-metil-cellulózzal töltött oszlopon kromatografáljuk, 5,1 pH-jú ammónium-acetáttal eluálva. A fő fázist C—18 szilikagéllel töltött oszlopon sótalanítjuk, így nyerjük a kívánt terméket, amely Hplc-re és Tlc-re tiszta (SI, SVI, SVII). Elemanalízis a C27H38N806.2CH3C02H.FI20 összegképletű vegyületre: számított: C% 52,54; H% 6,78; N% 15,82; mért: C% 52,74; H% 7,06; N% 15,58; [a]f +32,1° (c=l, metanol) [a]p26 +37,9° 2. példa N-amidino-Tyr-D-Arg-Gly-N(Et)-CH2CH2- -C6H4-4-N02.diacetát előállítása 708 mg H-Tyr-D-Arg-Gly-N(Et)-CH2CH2- -C6H4-N02.diacetátot 4 ml etanol és 1 ml DMF keverékében oldunk, majd hozzáadunk 246 mg 1 -amidino-3,5-dimetil-pirazol-acetátot és 0,2 ml trietil-amint, és a kapott keveréket 55°C-on 7 órán át, és szobahőmérsékleten egy éjszakán át keverjük. Ezután a keverékből vákuumban az oldószert eltávolítjuk, a maradékot etil-acetáttal elkeverjük, és a ka11 pott nyers terméket karboxi-metil-cellulózzal töltött oszlopon kromatografáljuk, az eluálást lineáris gradiensű ammónium-acetáttal végezve (0,005 mól 0,5 mól) 5,1 pH-n. A terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük és háromszor fagyasztva szárítjuk az illékony puffer oldat eltávolítására. A Tic (SI, SVI, SVII) egy fő komponenst jelez. A Hplc (30%-os acetonitril)* egy fő csúcsot mutat. Elemanalízis a C28H40N10O6.2CH3CO2H.l,5H2O ' összegképlet:! vegyületre: számított: C% 50,55; H% 6,72; N% 18,44; mért: C% 50,52; H% 6,72; N% 18,36; [al25 + 22,4& (c=l, metanol) [a! 546 + 25,1°J 3. példa H-Tyr-D-Arg-Gly-EtPhe(4N02)-NH2.diacetát előállítása (3 vázlat) (A) B0C-Phe(4N02).NH2 előállítása 19,33 g B0C-Phe(4N02)-at (J.Chem.Soc. Japan, 62, (1941), 31) DMF-ban oldunk, lehűtjük — 15°C-ra és hozzáadunk 6,3 g NMM-t és 8,51 g klór-hangyasav-izobut 1-észtert, majd a keveréket —15°C-on 5 percig keverjük. Ezután 1 órán át ammóniát buborékoitatunk keresztül az oldaton és a —15°C-os hőmérsékletet még további egy órán át fenntartjuk. Ezután a maradék ammónia eltávolítására nitrogént buborékoitatunk keresztül az oldaton, az oldószert vákuumban eltávolítjuk, és a visszamaradó szilárd anyagot etil-acetát és víz között megosztjuk. A szerves fázist 5 %-os citromsav oldattal, vízzel, 5%-os nátrium-hidrogén-karbonat-oldaüal, végül ismét vízzel mossuk, vízmentes magnézium-szulfáton szárítjuk, bepároljuk, és a maradékot etil-acetát/benzol Hegyben elkeverjük. A kitermelés 16,94 g (88%). Tisztítás Tlc-val (SI, Sill, SV). Elemanalízis a Ci4Hi9N305 összegképletű vegyületre: számított: C% 54,37; H% 6,15; N% 13,59; mért: C% 54,44; H% 6,12; N% 13,35. (B) H-Phe(4N02)-NH2.HC1 előállítása 16,9 g BOC-Phe(4N02) .NH2-ot 150 ml anizolban szuszpendálunk, majd 500 ml 1 mólos HCI/ecetsav eleggyel kezeljük 30 pereg szobahőmérsékleten, majd 35°C-os vákuumban betöményítjük, és a maradékot éterien elkeverjük. Kitermelés 13,6 g. Tlc-re tiszta (SI, SIH, SV). (C) H-EtPhe(4N02).NH2 előállítása 13,6 g H-Phe(4N02)-NH2.HCl-t 200 ml etanolban szuszpendálunk, majd 18,7 g nátri jm-hidrogén-karbonát-tal kezeljük. A kapó t szuszpenziót keverés közben vissza-12 7 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 6Ç
