193552. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új omega-merkapto-propionsav-amid-származékok és ilyen vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására

193552

Az enkefalináz hatását patkány striatum-ából készített membránfrakcióban határoztuk meg.

A striatumot jéggel hűtve eltávolítjuk, és 7,4 pH-értékű, husszoros térfogatú 0,05 mólos TRIS-pufferoldatban homogenizáljuk. Ezután 1000 g sebességgel centrifugálunk, majd a megfelelő frakciót két, egyenként 10 percig tartó, 20000 g sebességű centrifugálással kapjuk. A centrifugakalapácsot TRIS-pufferban szuszpendáljuk, és 4°C hőmérsékleten tartjuk. A fehérjék kiértékelését a Comassie-kék módszerrel végezzük.

15 percen át tartó 25°C hőmérsékletű előinkubálás után a fehérjéknek egy a likvot részét 15 percig 25°C hőmérsékleten, 20 nanomól, előzőleg tisztított olyan leucin-enkefalin jelenlétében, amely az első aminosavkomponensén triciummal jelezve van, továbbá 1 millimól puromicin és a vizsgálandó anyag jelenlétében TRIS-pufferoldatban inkubáljuk. A hidrolízist 0,2 n sósavoldat hozzáadásával leállítjuk, és az inkubált terméket 15 percen át tartó 95°C hőmérsékleten végzett hevítéssel fehérjementesítjük. Ilyen körülmények között a reakció előrehaladása lineáris.

A hidrolízis következtében keletkezett, triciált metabolitokat az enkefalintól porapak-Q oszlopon végzett kromatográfiáva! elkülönítjük; a metabolitokat TRIS-pufferoldattal eluáljuk, ekkor az enkefalin az oszlopon marad, és ezt követően etanollal eluálva összegyűjtjük.

A különböző, találmány szerinti vegyületek hatását az alábbi Táblázatban az 50%-os gátlást előidéző koncentrációval jellemeztük.

EREDMÉNYEK:

15

Az alábbi példákban Az enkefalináz gátlása: előállított vegyületek IC50 érték 10*2 * * * 6 mól-ban

kifejezve----------------1

~R5

2

1

3

1

4

1

30

0.1

36

0.05

38

0.06

2. A fájdalomcsillapító hatás vizsgálata

gyulladásos szöveteken

E vizsgálat céljára a módosított Randall-Selitto eljárást alkalmaztuk [Randall, L. O. és Selitto, J. J.: „Eljárás a fájdalomcsillapító hatás mérésére gyulladásos szöveten”; Arch. Int. Pharmacodyn. 111, 409 (1957)].

E módszer abban áll, hogy a fájdalomcsillapító hatást olyan patkányon vizsgáljuk, amelynek a fájdalommal szemben való érzékenységi küszöbét egy gyulladásos folyamat lecsökkenti.

A gyulladást úgy idézzük elő, hogy carrageenint 0,25 mg/talp mennyiségben a patkány hátsó talpának plantaris részébe fecskendezzük. A fájdalomérzést úgy idézzük elő, hogy

mechanikus nyomást gyakorolunk a patkány talpának hátsó részére, és ezt a nyomást analgeziméter segítségével fokozatosan növeljük.

A fájdalomküszöböt azzal a nyomásértékkel mérjük, amely szükséges ahhoz, hogy ennek hatására az állat a talpát elrántsa, vagy hangot adjon.

A vizsgálandó anyagot orálisan, a carrageenin befecskendezése után 4 órával adagoljuk, és a fájdalomküszöb kiértékelését először közvetlenül a carrageenin befecskendezése

16

előtt, majd a kezelés zük.

után egy órával végez-EREDMÉNYEK:

Az alábbi példákban DA (fájdalomcsillapító előállított vegyületek dózis) orálisan, mg/kgban

1

20

2

4

4

50

30

4 < DA< 20

SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás az (I) általános képletü vegyületek — ahol az (I) képletben

R, jelentése hidrogénatom vagy -C( = 0)-R’, csoport, ahol R’, jelentése 1-4 szénatomos alkilcsoport, R2 jelentése hidrogénatom, 1-4 szénatomos alkilcsoport feníl-í 1 -4 szénatomos alkil)-csoport;

R3 jelentése hidrogénatom, 2-tiazolil-, 4,5- -dihidro-2-tiazolil-, piridi 1 -, 2- -benzimidazolil-, 2-benztiazolilcsoport vagy adott esetben egy vagy két 1-4 szénatomos alkil-, 1-4 szénatomos alkoxi-, hidroxilcsoporttal, halogénatommal, (1-4 szénatomos alkoxi) -karbonil-metil-, fenil- (1-4 -szénatomos alkoxi)-csoporttal vagy -NXX’ csoporttal — amelyben X és X’ azonos vagy különböző, és jelentésük hidrogénatom vagy 1-4 szénatomos alkilcsoport — helyettesített fenilcsoport —

valamint az (I) általános képletü vegyületek savaddícíós sóinak az előállítására, azzal a megkötéssel, hogy

ha R2 jelentése hidrogénatom, akkor R3 jelentése szubsztituálatlan, vagy 1-4 szénatomos alkil-, 1-4 szénatomos alkoxicsoporttal vagy halogénatommal egyszeresen vagy többszörösen szubsztituált fenilcsoporttól, eltérő és

ha R2 jelentése metilcsoport, akkor R3 jelenté> se (karboxi-metil)-csoporttal szubsztituált fenilcsoporttól eltérő,

azzal jellemezve, hogy egy (II) általános képletű savat — ahol R’, és R2 jelentése ugyanaz*

9

5

10

15

20

25

30

35

4C

45

50

55

60

65