193538. lajstromszámú szabadalom • Eljárás teichomycin A2 tiszta 1,2,3,4 és 5 faktorok elkülönítésére

193538

6.0- ra pufferolva), 2 ml/perc áramlási sebesség mellett (belső standard: 3,5- -dihidroxitoluol, ír 8,84 perc);

f) a 270 MHz-es 'H NMR spektrum, amelyet DMSO-d6-ban veszünk fel, néhány csepp D20 hozzáadásával (koncentráció 25 mg/0,5 ml) (TMS mint belső standard, delta = 0,00 ppm) a következő jel-csoportokat mutatja: 0,8—1,5 (m); 1,7—2,3 (m); 2,7—4,0 (m);4,0—4,7 (m);4,8—5,8 (m); 6,2—8,1 (m);

g) egy sóképzésre alkalmas savas funkcióval rendelkezik;

h) egy sóképzésre alkalmas bázisos funkcióval rendelkezik;

i) molekulásúlya kb. 1875, FAB tömegspektrometriával meghatározva;

teichomycin A2 2 faktor: fehér amorf por, amely melegítés hatására 210°C-on sötétedni kezd, és 250°C-on teljesen elbomlik, ezenkívül

a) korlátlanul oldható vízben pH 7,0 felett vagy pH 2 alatt, dimetilformamidban, dimetilszulfoxidban és propilénglikolban; gyengén oldható metilcelloszolvban és glicerinben;

rosszul oldható metanolban és etanolban; csaknem oldhatatlan kloroformban, benzolban, n-hexánban, acetonitrilben, etiléterben, acetonban, etilacetátban, széntetrakloridban;

b) UV spektruma a következő abszorpciós maximumokat mutatja:

— 0,1N sósavban:

larnbdamax 278 nm (Eu?m = 48)

— pH 7,4 foszfát-pufferben: lambda,TM* 278 nm (Eí^, = 49,0)

— 0,1N nátriumhidroxidban: lambdaműJt 297 nm (EÍ* = 70,0);

c) IR abszorpciós spektruma nujolban a következő megfigyelhető abszorpciós maximumokat mutatja: 3700—3100, 2960— 2860 (nujol), 1645, 1590, 1510, 1460 (nujol), 1375 (nujol), 1300, 1260, 1230, 1180, 1150, 1060, 1025, 970, 890, 845, 815, 720 (nujol);

d) elem-analízise, miután a mintát előzetesen kb. 140°C-on közömbös atmoszférában szárítottuk (súlyveszteség = 9,8%), a következő közelítő százalékos összetételt mutatja (átlag): szén 56,15%; hidrogén 5,15%; nitrogén 6,30%; klór 3,90%; oxigén (a különbség alapján) 28,50%;

e) retenciós ideje (tR) 22,6 perc inverz fázisú HPLC-vel elemezve, 5 p-os Zorbax ODS oszlop alkalmazásával, az eluálást a B oldat 0—50%-nak megfelelő lineáris grádiense mellett — az A oldatban — végezve, 40 perc alatt (A oldat: 9:1 25 mM NaH2P04:acetonitril, 0,1N NaOH-dal pH

6.0- ra pufferolva; B oldat: 3:7 25 mM NaH2PÖ4:acetonitril 0,1N NaOH-dal pH

6.0- ra pufferolva), 2 ml/perc áramlási sebesség alkalmazásával (belső standard: 3,5-dihidroxi-toluol, ír 8,84 perc);

15

f) 270 MHz-en ’H NMR spektrumban — amelyet DMSO-d6-ban vettünk fel, néhány csepp D20 hozzáadásával (koncentráció: 25 mg/0,5 ml) {TMS mint belső standard, delta = 0,00 ppm (a következő jel-csoportok figyelhetők meg: 0,7—1,5 (m); 1,8— 2,2 (m); 2,7—4,5 (m); 4,6—5,7 (m); 6,2— 8,1 (m);

g) egy sóképzésre képes sav-funkcióval rendelkezik;

h) egy sóképzésre képes bázis-funkcióval rendelkezik;

i) molekulasúly kb. 1877, FAB tömegspektrometriával meghatározva; teichomycin A2 3 faktor: fehér amorf por, amely melegítés hatására 205°C-on kezd elbomlani, és teljesen elbomlik 250°C-on, mimellett a következő tulajdonságokkal rendelkezik:

a) korlátlanul oldható vízben pH 7,0 felett vagy pH 2 alatt, dimetilformamidban, dimetilszulfoxidban és propilénglikolban; enyhén oldható metilcelloszolvban és glicerinben;

rosszul oldható metanolban és etanolban; csaknem oldhatatlan kloroformban, benzolban, n-hexánban, acetonitrilben, etiléterben, acetonban, etilacetátban és széntetrakloridban;

b) UV abszorpciós spektruma a következő abszorpciós maximumokat mutatja:

— 0,1N sósavban:

lambdamű* 278 nm (E^ = 49,2)

— pH 7,4 foszfát-pufferben: lambdama* 278 nm (Eu^ = 50,8)

— 0,1N nátriumhidroxidban: larnbdama* 297 nm (Ej?m — 72,7);

c) IR abszorpciós spektruma nujolban a következő megfigyelhető abszorpciós maximumokat mutatja: 3700—3100, 2960— 2850 (nujol), 1645, 1590, 1510, 1460 (nujol), 1375 (nujol), 1300, 1230, 1180, 1150, 1120, 1060, 1030, 970, 890, 845, 820, 800, 720 (nujol);

d) élem-analízise, miután a mintát előzetesen kb. 140°C-on közömbös atmoszférában szárítottuk (súlyveszteség = 12,0%), a következő közelítő százajékos összetételt (átlag) mutatja: szén 56,26%; hidrogén 5,20%; nitrogén 6,69%; klór 3,95%; oxigén (a különbség alapján) 27,90%;

e) retenciós idő (ír) 23,3 perc inverz fázisú

HPLC-vel elemezve, 5 p.-os Zorbax® ODS oszlopot alkalmazva, az eluálást a B oldat 0—50% lineáris grádiense mellett — az A oldatban — végezve, 40 perc alatt (A oldat: 9:1 25 mM NaH2P04:acetonitril, 0,1N NaOH-dal pH 6,0-ra pufferolva; B oldat: 3:7 25 mM j NaH2P04:acetonitril

0,1N NaOH-dal pH 6,0-ra pufferolva), 2 ml/perc áramlási sebességgel. Belső standard: 3,5-dihidroxitoluoj, t* 8,84 perc) ;

f) 270 MHz-en !H NMR spektruma DMSO-d6-ban, néhány csepp D20 hozzáadásával (koncentráció 25 mg/0,5 ml) (TMS mint belső standard, delta = 0,00 ppm) a következő jel-csoportokat mutatja: 0,7—

16

9

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65