193528. lajstromszámú szabadalom • Eljárás A-21978C ciklusos peptid-acil-származékok előállítására
ríteni, létezik e ilyen célra felhasználható alkalmas enzim. Ilyen enzimet találni még nehezebb, ha a szubsztrát antibiotikum ciklu sós pepiid magot tartalmaz. Mivel az enzimek szubsztrát-specificitása nagyfokú, a szubsztrát peptidrészében és oldalláncában levő különbségek ki fognak hatni a dezaeilezési kísérlet kimenetére. Ezenfelül sok mikroorganizmus nagy számban termel peptidázokat, melyek a peptidrész különböző részeit támadják meg. Ez gyakran a termékek kezelhetetlen keverékét eredményezi. Mindegyik A—21978C antibiotikumban (2)általános képlet a zsírsav-oldallánc (RN) a triptofán-rész alfa-aminocsoportjához kapcsolódik. Hivatkozunk az egyidejűleg benyújtott szabadalmi leírásunk (Docket No. X—5279) megállapítására, mely szerint a zsírsav-oldallánc enzimatikusan úgy hasítható le, hogy közben a molekula többi része ép marad. A dezaeilezési reakcióra használható enzimet az Actinoplanaceae családba tartozó egyes mikroorganizmusok, előnyösen az Actinoplanes utahensis NRRL 12052 mikroorganizmus, vagy egy variánsa termeli. A dezacilezés végrehajtása céljából az A-21978C komplex, az A-21978C C0, C,, C2, C3, C4 és C5 faktorok, a blokkolt A-21978C komplex és a blokkolt A-21978C C0, C,, C2, C3, C4 és C5 faktorok közül kiválasztott antibiotikumokat hozzáadjuk a mikroorganizmus tenyészetéhez. A tenyészetet a szubsztráttal addig inkubáljuk, amíg a dezacilezés teljesen végbemegy. A kapott megfelelő A-21978C ciklusos peptidet a fermentléből ismert módon különítjük el. Az enzimatikus dezaeilezéssel kapott ciklusos peptidek vagy gyógyszerészetifeg elfogadható sóik a (3) általános képlettel írhatók le, ahol R° és R' egymástól függetlenül hidrogénatomot vagy amino védőcsoportot jelent. Az A-21978C komplex vagy az A-21978C komplex egyes C0, C,, C2, C3, C4 és Cs faktorának acilrészét eltávolítva (3) általános képletü vegyületeket kapunk, ahol R° és R' hidrogénatomot jelent. E vegyület az A - -21978C faktorok mindegyikében meglévő közős ciklusos peptid. Kényelmi okból e vegyület A-21978C magnak fogjuk nevezni. E vegyület a (4) képlettel is leírható, melyben „3MG" L-treo-3-metii-glutaminsavat jelent. A szakember előtt nyilvánvaló, hogy az A-21978C mag és a blokkolt A-21978C magok akár szabad aminok, akár savaddiciós sók formájában előállíthatók. Noha bármilyen alkalmas savaddiciós só használható, előnyben részesítjük a gyógyszerészetileg elfogadhatókat. Az előnyben részesített dezacilező enzimet, az A. utahensis NRRL 12052-t az „Agricultural Research Culture Collection (NRRL), 3 Nothern Regional Reseach Center, U.S.Department of Agriculture, 1815 North University St., Peoria, Illinois 61604, U.S.A." bocsátja a nyilvánosság rendelkezésére NRRL 12052 nydvántartási szám alatt. Az itt leírt 1. preparálás az A-21978C mag fermentációs előállítását ismerteti, melynek során szubsztrátként A-21978C komplexet és mikroorganizmusként Actinoplanes utahensis NRRL 12052- -t használunk. A (3) általános képletü A—21978C mag előállítására használható egyéb Actinoplanaceae tenyészetek a nyilvánosság részére a Nothern Regional Research Laboratory-ból állnak rendelkezésre, a következő nyilvántartási számokon: Actinoplanes missouriensis NRRL 12053 Actinoplanes sp. NRRL 8122 Actinoplanes sp. NRRL 12065 Streptosporangium roseum var. hoilandensis NRRL 12064 Az Actinoplanaceae családon belül valamely adott mikroorganizmus törzs dezacilező hatásosságát a következő eljárással határozzuk meg. Alkalmas táptalajt beoltunk a mikroorganizmussal. A tenyészetet rotációs rázógépen mintegy 28°C-on 2-3 napig inkubáljuk. Ezután a szubsztrát antibiotikumok egyikét hozzáadjuk a tenyészethez, a fermentációs közeg pH-ját körülbelül 6,5 értéken tartva. A tenyészet aktivitását Micrococcus luteus próbával mutatjuk ki. Az antibiotikus aktivitás csökkenése azt jelenti, hogy a mikroorganizmus termeli a dezacilezéshez szükséges enzimet. Ezt azonban a következő módszerek valamelyikével kell igazolni: 1) HPLC elemzés az ép mag jelenlétének kimutatására, vagy 2) alkalmas oldallánccal (például lauroil-, n-dekanoil- vagy mdodekanoilcso - port) való újraacilezés az aktivitás helyreállítása céljából. A találmány tárgyát az A-21978C mag (3 általános képletü vegyület) acilezése útján kapott, 1 általános képlettel leírható új vegyületek előállítása képezi. Előnyben részesített, jellemző 4-10 szénatomos alkiléncsoportok az alábbiak: R5 I-CH-, ahol R5 jelentése 3 vagy 4 szénatomos alkilcsoport (azaz: n-propil-, izopropil-, n-buti1 , terc-butil-, izobutil- vagy 1-metil-propil-csoport),-(CH2)m-, ahol m 4-10 közötti egész számot jelent, és CHa-jCH^-CH-jCH^p-, ahol p 1-8 közötti egész számot és q 0-7 közötti egész számot jelent, azzal a kikötéssel, hogy p—j-q nem lehet nagyobb 8-nál. Előnyben részesített jellemző 3-13 szénatomos aikilcsoportok: b) -(CH2)„CH3, ahol n 2-12 közötti egész számot jelent, és 4 193528 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
