193516. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hőstabil alfa-amiláz kódoló gén klónozására Eserichia Coli és Bacillus Subtilis
193516 17 18 (iii) és az (i) és (ií) lepesben kapott lineáris DNS szekvenciákat T4 DNS-ligáz segítségével összekapcsoljuk 2 Az 1 igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a hőstabil alfa-amiláz kódoló 5 gént tartalmazó plazmidot ATCC 31783 letéti számú Bacillus stearothermophilus törzsből vagy annak valamely variánsából vagy mutánsából vagy mutánsának almutánsából nyerjük 3 Eljárás Bacillus stearothermophilus hősta- 10 bil alfa amiláz enzimjét termelni képes Escherichia coli vagy Bacillus subtilis mikroorganizmus előállítására, azzal jellemezve, hogy valamely, az 1. igénypont szerinti eljárással előállított kiméra plazmidot valamely — adott eset- 15 ben már másik alfa-amiláz kódoló génnel rendelkező kiméra plazmidot tartalmazó — Escherichia coli vagy Bacillus subtilis törzsbe transzformálunk, és a transzformálásokat izoláljuk 4 A 3 igénypont szerinti eljárás ATCC 20 31788, illetve ATCC 31789 letéti számú Escherichia coli törzs előállítására, azzal jellemezve, hogy pBR322 plazmidból indulunk ki, es Escherichia coli C600, illetve Escherichia coli RR1 törzset transzformálunk 25 5 A 3 igénypont szerinti eljárás ATCC 31791, illetve ATCC 31792 letéti számú Escherichia coli törzs előállítására, azzal jellemezve, hogy pWL625, illetve pBR325 plazmidból indulunk ki és Escherichia coli RR1 törzset transz- 30 formálunk 6 A 3. igénypont szerinti eljárás ATCC 31790 letéti számú Escherichia coli törzs előállítására, azzal jellemezve, hogy az 5. igénypont szerinti eljárással előállított ATCC 31791 letéti számú Escherichia coli törzsből plazmidot izolálunk, és az izolált kiméra plazmidot az 5, igénypont sze rinti eljárással előállított, ATCC 31792 letéti szá mú Escherichia coli törzsbe transzformáljuk. 7. A 3. igénypont szerinti eljárás ATCC 31786 letéti számú Bacillus subtilis előállítására, azzal jellemezve, hogy pC194 plazmidból indulunk ki és ATCC 31785 letéti számú Bacillus subtilis törzset transzformálunk. 8. A 3. igénypont szerinti eljárás ATCC 31784 letéti számú Bacillus subtilis előállítására, azzal jellemezve, hogy pCl94 plazmidból indulunk ki és Bacillus subtilis 1A289 törzset transzformálunk. 9 Eljárás hőstabil alfa-amiláz előállítására, azzal jellemezve, hogy valamely, az 1 igény pont szerinti eljárással előállított kiméra plazmidot tartalmazó, a 3 igénypont szerinti eljárással előállított Escherichia coli vagy Bacillus subtilis mikroorganizmust alkalmas tápközegen tenyésztünk, és a termelt alfa-amilázt izoláljuk 10 A 9 igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy ATCC 31788, ATCC 31789, ATCC 31790, ATCC 31791 vagy ATCC 31792 letéti számú Escherichia coli törzset vagy ATCC 31784 vagy ATCC 31786 letéti számú Bacillus subtilis törzset tenyésztünk Rajz nélkül Kiadja: Országos Találmányi Hivatal, Budapest A kiadásért felel: Himer Zoltán osztályvezető N» 2708. Nyomdaipari vállalat, Uzsgorod
