193512. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hibrid emberi leukocita interferonok előállítására
21 193512 22 1. táblázat (folytatás) LelF hibrid Hátsó rész Töredék BD Pvu II Pst 1 rész a pLelF D trp 11-ből ( -550 bázispár) BF Pvu ll-Pst I rész a pLelF F trp 1-ből ( -700 bázispár) BG Pvu ll-Pst I rész a pLelF G-ből ( -750 bázíspár) DB Pvu ll-Pst 1 rész a pLelF B trp 7-ből ( -750 bázispár) DF Pvu ll-Pst 1 rész a pLelF F trp 1-ből ( -700 bázispár) DG Pvu ll-Pst I rész a pLelF G-ből ( -750 bázispár) FA Pvu ll-Pst I rész a pLelF A trp 25-ből ( -550 bázispár) FB Pvu ll-Pst I rész a pLelF B trp 7-ből ( -750 bázispár) FD Pvu ll-Pst I rész a pLelF D trp 11 -bői ( -550 bázispár) FG Pvu ll-Pst I rósz a pLelF G-ből ( -750 bázispár) IA Bgl ll-Pst I rész a pLelF A trp 25-ből ( -430 bázispár) Az 1. táblázatban leírt első négy hibrid leukocita interferont két LelF kifejeződési plazmidból állítottuk elő. A LelF A és a LelF D kiegészítő dezoxiribonukleinsavakban egyformán megtalálható Bgl II helyet használtuk fel a pLelF trp AD (Bgl II) kifejeződési plazmid kialakításához, amely kódolja a LelF A amino terminális 63 aminosavját, valamint a LelF D karboxil terminális 102 aminosavját. Ugyanezt a helyet használtuk fel a pLelF trp DA (Bgl II) kifejeződési plazmid kialakításához, amely kódolja a LelF D amino N-terminális 64 aminosavját és a LelF A karboxil-terminális 102 aminosavját. A Pvu II helyet két másik hibrid interferont kifejező plazmid kialakításához használtuk fel: a LelF A amino terminális 91 aminosavja es a LelF D karboxil-terminális 74 aminosavja [pLelF trp AD (Pvu II)], valamint a LelF Damino-terminális 92 aminosavja és a LelF A karboxil-termínális 74 aminosavja [pLelF trp DA (Pvu II)]. Összefoglalva, pLelF AD trp (Pvu II): A pLelf A trp 25 Xba I és Pst l enzimmel végzett hasításánál képződött nagy (3900 bázispár körüli) töredékét összekapcsoltuk a pLelF A trp 25 Xba I es Pvu II közötti, 285 bázisparból álló töredékével és a pLelF D trp 11 Pvu II és Pst I közötti, közelítőleg 550 bázispárból álló töredékével pLelF DA trp (Pvu II): A pLelF A trp 25 Xba I és Pst I enzimmel végzett hasításánál képződött nagy (3900 bázispár körüli) töredékét összekapcsoltuk a pLelF D trp 11 Xba I és Pvu II közötti, 288 bázispárból álló töredékével és a képződő kifej. Aminosavak plazmid 93-166 pLelF BD trp (Pvu II) 93-166 pLelF BF trp (Pvu II) 93-166 pLelF BG trp (Pvu II) 93-166 pLelF DB trp (Pvu II) 93-166 pLelF DF trp (Pvu II) 93-166 pLelF DG trp (Pvu II) 92-165 pLelF FA trp (Pvu II) 93-166 pLelF FB trp (Pvu II) 93-166 pLelF FD trp (Pvu II) 93-166 pLelF FG trp (Pvu II) 152-166 pLelF IA trp (Bgl II) pLelF A trp 25 Pvu II és Pst I közötti, közelítőleg 550 bázispárból álló töredékével. pLelF AD trp (Bgl II): A pLelF A trp 25 Bgl II és Pst I enzimmel végzett hasításánál képző- 5 dött nagy töredéket összekapcsoltuk a pLelF D trp 11 Bgl II és Pst I közötti mintegy 600 bázispárból álló töredékével. pLelF DA trp (Bgl II): A pLelF D trp 11 Bgl II és Pst I enzimmel végzett hasítása útjával kép- 10 ződött nágy töredéket egy közelítőleg 700 bázispárból álló töredékkel kapcsoltuk össze, amelyet úgy kaptunk, hogy a pLelF A trp 25 öt Pst I enzimmel elhasítottuk, majd B1II enzimmel részlegesen hasítottuk. 15 ' Az 1. táblázatban feltüntetett ötödik hibrid. pLelF AB trp (Pvu II): A pLelF A trp 25 Xba I és Pst l enzimmel végzett hasítása útján nyert nagy (3900 bázispár körüli) töredéket összekapcsoltuk a pLelF A trp 25 Xba I és Pvu II kö- 20 zötti, 285 bázispárból álló töredékével és a pLelF B trp 7 Pvu II enzimmel végzett részleges hasítása és Pst I enzimmel végzett hasítása útján kapott, közelítőleg 750 bázispárból álló töredékével. 25 Hasonló módon állítottuk elő az 1. táblázatban feltüntetett többi szerkezetet is. További példaként utalunk arra, hogy a LelF C és/vagy LelF H részt tartalmazó hibrid előállításánál felhasználhatjuk a közös Bbv I helyeket, amelyek 30 körülbelül a 294. számú nukleotidnáí (GCTGC) találhatók a génszekvenciákban. Hasonló módon alakíthatunk ki más új hibrid leukocita interferonok mikrobiológiai úton való kifejezésére alkalmas plazmidokat. a tér- 35 mészetbenelőforduló leukocita interferonok tei\2
