193294. lajstromszámú szabadalom • Kérődzők emésztését előnyösen befolyásoló készítmény
193294 ségű kanamicin B jétenlétében növekedni képesek A Hh-GYOKI-1-123 (Km*) jelű törzset cellulózt tartalmazó RGCA táptalajon szélesztjük, és a táptalajokhoz 1000, 5000, illetve 10000 pg/ml kanamicin B-t adagolunk. 168 órán át, 35°C hőmérsékleten, anaerob körülmények között inkubáljuk a tenyészeteket, majd izoláljuk a 10000 pg/ml antibiotikum jelenlétében növekvő törzseket. így a Hh-GYOKI-1-123 jelű törzsből spontán szelektálással kanamicin B-vel szemben igen nagymértékben rezisztens, spontán mutánshoz jutottunk. Az egyik törzset Hh-GYOKI-1 -123Sz jellel jelöltük, és MNG 00287 sorszámmal letétbe he-lyeztük az Országos Közegészségügyi Intézetnél a Mikroorganizmusok Nemzeti Gyűjteményében. C.)' A genetikailag jelzett mikroorganizmusok visszajuttatása a bendőbe A Hh-GYOKI-1-123 (Km*) jelű törzs RGCA ferdeagaron -(-4°C hőmérsékleten tárolt tenyészetével beoltjuk az alábbi összetételű RGCFa jelű steril táptalajt: 1. Dikálium-hidro-11 gén-foszfát 0,3 $ o 45 ml oldat 2. Diammónium-szulfát 0,6 3 Nátrium-klorid 0,6 9( 0 Magnézium-szulíát-monohidrát 0,06 °a 0 Kalcium-klorid-dihidrát 0,06 °/{ 3 Kálium-dihidrogén-foszfát 0,3 °a p 45 ml elegy 3 Bacto-cellulóz+ 1,8 °a 6 Agár (Bac-12 to) + 3,0 % 65 ml elegy 4. Élesztőkivonat 0,1 % 20 ml elegy 5. Cisztein-hidroklorid--monohidrát 0,1 % 20 ml oldat 6. Nátrium-tioszulíát cT Nátrium-karbonát 0,2 % 10 ml elegy 7. Bendőfolyadék++ 20 ml +Difco Laboratories, Detroit, USA ++Lásd élőbb. A hét külön elkészített elegy megadott mennyiségeit a megadott sorrendben mérjük össze. A tenyésztést 500 ml térfogatú, 150 ml táptalajt tartalmazó lombikokban végezzük anaerob körülmények között. 48 óra múlva ellenőrizzük a növekedést, majd szénával etetett juh takarmányához keverjük a tenyészetet. Az adagolás előtt és az azt követő napokon a bendőbe nyúló fisztulán mintát veszünk, a minták térfogata 50-200 ml. A mintákat kanamicin B-t és antibiotikumot nem tartalmazó RGCA táptalajokra szélesztjük HB oldattal történő megfelelő hígítást követően. A tenyészeteket 72 órán át, 35°C hőmérsékleten, anaerob körülmények között inkubáljuk, majd meghatározzuk a kifejlődött baktériumtelepek számát. Az eredményeket a 2. táblázatban adjuk meg. 2 táblázat A Hh-GYOKI-1-123 (Km*) törzzsel kezelt állat bendőflórájának változása Az állat 340 ml, milliliterenként 4,7xl06 baktériumot tartalmazó tenyészetet kapott, orális adagolással. 5 10 15 20 25 30 35 40 Se j tszám /ml Minta Antibiotikum nélkül 1000 jug/ml Kanamicin B jelenlétében Adagolás előtt : o X ir\ 0 Adagolás után: 1 nap 5,9 x 10« 2 x 10* 2, nap 3,2 x 107 4,1x 104 3, nap 2,4 x 10* 3,1 x 10* 6. nap 3,9 v 10’ 1,8 X104 8. nap 9,8 x io* 1,05x10ç 15. nap 8,1 X U)5 3,1 X10* A táblázat adataiból kiderül, hogy az adagolt mikroorganizmus a bendőben hosszú időn át jelen van és osztódik. A 15. napon a fentiekben megadottak szerint eljárva tenyésztettük és adagoltuk az állatnak a Hh-GYOKI-l-123Sz jelű, 10000 pg/ /ml kanamicin B-re rezisztens mikroorganizmust. A minták előzőekben megadottak szerinti tenyésztése után kapott eredményeket a 3. 65 táblázatban adjuk meg. 7
