193294. lajstromszámú szabadalom • Kérődzők emésztését előnyösen befolyásoló készítmény
A táblázat adataiból kitűnik, hogy a találmány szerinti mikroorganizmus tenyészetek adagolásával a bendőflóra metabolikus tevékenysége révén keletkező illózsírsavak aránya a bendőtartalomban széles határok között változtatható. A Hh-GYOKI-48a jelű törzsből készített tenyészettel például jelentősen fokozható a propionsav termelés, ugyanakkor például a Hh-GYOKI-109b mikroorganizmus tenyészetével az ecetsav termelése növelhető. Az egyes zsírsavak termelésének fokozódása megfigyelhető más élő mikroorganizmust nem tartalmazó táptalajon (S) és megfigyelhető a szokásos bendőbaktériumok jelenlétében is (NS). Kísérleti rendszerünkben a monenzin-Na-sóval egy-két tizeddel csökkent az ecetsav/propionsav arány (d, e). A példa szerinti eljárással kiválasztott mikroorganizmusokat az 1. példa B. pontjában megadottakat megismételve genetikailag jelezzük, bendős állatoknak adagoljuk, vizsgáljuk szaporodásukat és fentmaradásukat a bendőben. A bendőben hosszú időn át szaporodó és kedvező metabolizmussal rendelkező törzset megfelelő alakban adagoljuk az illózsírsav termelés szabályozására. 5. példa Állatoknak adagolható baktériumkészítmény előállítása Az adagolandó baktériumot a 4. példában megadott összetételű, RGCA+CG jelű táptalajon tenyésztjük anaerob körülmények között, ismert módon. A tenyésztés után a sejteket ismert módon elkülönítjük, például szűréssel vagy centrifugálással. Az elkülönített sejteket fiziológiás pufferban (lásd 4. példa) szuszpendáljuk és fagyasztva szárítjuk. A liofilezett baktériumkészítményt tároljuk és adott esetben, megfelelően formulázva állatoknak adagoljuk. A mikroorganizmusok tenyésztését végezhetjük más, a szakemberek körében jól ismert táptalajokon is, például szénforrásként glükózt, keményítőt stb., nitrogéníorrásként szervetlen sókat tartalmazó táptalajon is. Adagolhatjuk a készítményt a takarmányhoz keverve, de adagolhatjuk az ivóvízzel is, önmagában vagy más biológiailag aktív anyagokkal, mint például antibiotikumokkal, vitaminokkal együtt. A liofilezett készítményen kívül előállíthatunk más termékeket is. Adagolhatjuk a mikroorganizmust a centrifugálás vagy szűrés után kapott baktériumtömeg megfelelő vivőanyagokkal vagy hígítóanyagokkal — például különböző alumínium-szilikátokkal (zeolitokkal, bentonítokkal vagy attapulgíttal) vagy például kalcium-karbonáttal, abrakkal, premix-szel vagy más takarmánnyal — való keverése után is. 23 A használt takarmánytól és a termelési iránytól függően állapítjuk meg, hogy a találmány szerinti eljárással előállított, a bendőflórát előnyösen befolyásoló mikroorganizmusok közül melyiket adagoljuk, és milyen menynyiségben. Ha az ecetsav-propionsav hányadost csökkenteni kívánjuk, úgy például a Hh-GYOKI-48a törzsből készített tenyészetet, ha növelni kívánjuk, úgy például a Hh-GYOKI-3- -81Me mikroorganizmus tenyészetét adagoljuk. A kívánt hatás eléréséhez szükséges mikroorganizmus sejtszám megállapítása szakember számára nem jelent nehézséget. A sejteket általában olyan mennyiségben adagoljuk, hogy a bendőtartalom egy milliliterében előnyösen 5xl02-5xl0/ közötti számú adagolt mikroorganizmus sejt legyen jelen. 6. példa A Hh-GYOKI-48a és a Hh-GYOKl-l-123Sz mikroorganizmusok adagolása juhoknak A 4. példában megadott összetételű RGCA+CG jelű táptalajt 121°C hőmérsékleten sterilezzük 20 percen át. A sterilezés előtt 15-15 milliliterenként kémcsövekbe kitöltött táptalajt beoltjuk a Hh-GYOKI-48a illetve a Hh-GYOKI -1- 123Sz mikroorganizmusok RGCA jelüű táptalajról (összetételét lásd az 1. példában) készített szuszpenziójával, majd 37+) hőmérsékleten 36 órán át inkubáljuk a tenyészeteket anaerob körülmények között. A tenyészet ellenőrzése után 30 ml inokulummal 5 liter hasznos térfogatú fermentorban sterilezett RGCA+CG jelű táptalajt oltunk, majd 37CC hőmérsékleten anaerob körülmények között tenyésztünk 40 órán át. A tenyészet ellenőrzése után elkülönítjük a fermentléből a mikroorganizmus sejteket. A sejtek izolálását percenként 5000-et forduló centrifugarotorban végezzük, amikor is a Hh-GYOKl-48a mikroorganizmussal oltott fermentorból 58 g, a 123Sz mikroorganizmussal oltottból pedig 53 g baktériumtömeget kapunk. Az így előállított terméket 2x800 g kukoricadarával gondosan összekeverjük, majd 8-8 részre osztjuk. 23 merinoi juhot három csoportra osztunk, majd ad libitum réti szénával (600-900 g/nap) etetünk. A takarmányhoz 100 g/nap mennyiségben ásványi sókat és vitaminokat tartalmazó premixet adunk (a premix kukoricadara vivőanyagot tartalmaz). Négy napon át tartjuk az állatokat, majd egy napon át éheztetjük és ezután az 1-7. sorszámú állatnak a fentieken kívül 100 g kukoricadarát, a 8-15. sorszámú állatnak a Hh-GYOKI-l-123Sz baktériumot, a 16-23. sorszámú állatnak pedig a Hh-GYOKI-48a jelű mikroorganizmust tartalmazó készítményt adjuk, amit a kiéhezett állatok gyorsan elfogyasztanak. Az etetést ezután a fentiek szerint folytatjuk 5 héten keresztül, és hetenként meghatározzuk az állatok súlyát. A következő, 10. táblázatban megadott eredményeket kaptuk. 24 193294 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 13
