193294. lajstromszámú szabadalom • Kérődzők emésztését előnyösen befolyásoló készítmény
193294 19 20 Szűrt bendőfolyadék 10,0 % Nátrium-karbonát 0,4 % Cisztein-hidroklorid-monohidrát 0,05 % Nátrium-tioszulfát 0,008 % Cellulóz (Bacto)+ 0,3 % Glükóz 2,0 % +Lásd előbb. A nyomelem oldat összetétele Cink-diklorid Réz-diklorid-dihidrát Dinátrium-tetraborát-dekahidrát Ammónium-molibdenát-tetrahidrát Vas-triklorid-hexahidrát Mangán-diklorid-tetrahidrát Ionmentes víz ad a következő: 40 mg 10 mg 10 mg 10 mg 200 mg 10 mg 1000 ml. A tenyészetekkel beoltjuk a fentiek szerint készített, Erlenmeyer-lombikokban levő előkészített táptalajokat, az oltást 2 ml tenyészet/50 ml táptalaj arányban végezzük, egy párhuzamost használva és a nem sterilezett tenyészetet is oltva. Oltást követően 40 órán át anaerob körülmények között tenyésztünk, majd 10% tömény hangyasavval leállítjuk a szaporodást és megvizsgáljuk a tenyészetek illózsírsav tartalmát. A tenyészeteket gézlapon szűrjük, majd percenként 4000-et forduló rotorban 15 percen át centrifugáljuk. Ismét szűrjük az elegyet, majd Carlo Erba GI-452 típusú lángionizációs detektorral felszerelt gázkromatográf elválasztó oszlopára juttatjuk a C2-C5 szénatomszámú zsírsavak meghatározására. Oszlop hőmérséklet: 150°C Elválasztó oszlop: 2 m hosszú, 4 mm belső átmérőjű üvegcső, töltete: 10% etilén-glikol-adipát-(-2% O-foszforsav, szilánozott szilikagél hordozón (0,2-0,3 mm). 5 10 15 20 25 30 35 40 Injektor hőmérséklete: 190°C. N2 áramlási sebesség: 50 ml/perc. H2 áramlási sebesség: 50 ml/perc. Levegő áramlási sebesség: 200 ml/perc. Papírsebesség: 160 cm/óra. Kromatografálási idő: 20 perc. Mintamennyiség: 1 pl. Minden mintából négy párhuzamos mérést végzünk. A standard oldat ecetsavat, propíonsavat, i-vajsavat, vajsavat, i-valeriánsavat és valeriánsavat tartalmaz. A komplett takarmányon tartott állat bendőjéből izolált, illetve a genetikailag jelzett baktériumok közül több mint kilencvenet vizsgáltunk, a pozitív eredményeket adókat többször. A reprezentatív eredményeket az alábbi, 8. táblázatban adjuk meg. A táblázatban használt jelek jelentése a következő: + S: sterilezés után oltva; NS: élő bendőflórát tartalmazó tenyészet oltva a. ny: nyomnyi mennyiség b. negatív kontroll — a kísérletekhez használt bendőfolyadékból, fiziológiás puíferből és takarmányból a fentiek szerint előállított táptalaj illózsírsav tartalma ( 12 mérés átlaga) c. pozitív kontroll — a bendőfolyadékból, fiziológiás pufferből és takarmányból a fentiek szerint előállított, az eredeti bendőbaktériumokat tartalmazó és inkubált tenyészet illózsírsav tartalma (12 mérés átlaga) d. mint c, de a táptalajhoz 5 ppm monenzint (Na-só) (Eli Lilly, Indianapolis 46206, USA) adagoltunk (6 mérés átlaga) e. mint c, de a táptalajt 10 ppm monenzinnel (Na-só) egészítettük ki (6 mérés átlaga).
