193291. lajstromszámú szabadalom • Eljárás biológiailag aktív heptapeptidek és sóik, valamint az ezeket tartalmazó gyógyszerkkészítmények előállítására
3 193291 4 Makroion ketrecekben helyeztük el, alomként faforgácsot használtunk. Az állatok tetszés szerinti mennyiségű vizet és élelmet — Altromin 1321 standard táp, 19 % nyers protein tartalommal — kaptak. Az (I) általános képletű peptideket oldat formában, szubkután adagoltuk, naponta 10, 50 és 100 ng/kg dózisban, az oldatokat 100 ng/ml koncentrációjú alapoldatból készítettük, fiziológiás sóoldatos hígítással. Szövetminták előkészítése 3 g májat 9 ml TKM-puffer-szacharóz oldatban homogenizálunk, jeges hűtés közben 600 fordulat/perc sebességgel működtetett Potter-homogenizálóban, 2 percen át, majd untracentrifugában 4°C-on 10000 g-vel 20 percen át centrifugáljuk, a felülúszót — azaz a mikroszomális sejt-folyadékot — leöntjük. Meghatározás kivitelezése A mikroszomális sejt-folyadék protein-tartalmát biuret-módszerrel meghatározzuk, majd TKM-pufferrel 1 mg/ml-re állítjuk be a protein-koncentrációt. Ezt követően kétszer desztillált vízzel 0,25 mg protein/ml mikroszomális sejt-folyadék koncentrációra hígítjuk. Ezután hozzáadunk 0,15 ml reakcióközeget, 0,05 ml (50 pg) piruvát-kináz-oldatot és 0,1 ml 1 pCi aktivitású l4C-aminosav-keveréket. Az inkubált elegy térfogata minden esetben 1 ml. A mintákat 37°C-os vízfürdőn 35 percen át nkubáljuk, majd a fehérjét 2 ml 10 %-os tril.lór-ecetsavval kicsapjuk. A csapadékot triklór-ecetsav-oldat hozzáadásával, majd azt 5 követő centrifugálással (3600 g, 5 perc) ismételten addig mossuk, míg a felülúszó radioaktivitás-mentes lesz. A maradékot 1,0 ml Lumaso.lve:ban oldjuk, és egy éjszakán át 37°C-on állni hagyjuk, 10 ezalatt az oldat kitisztul. A minta radioaktivitását folyadék-szcintillíciós berendezésben (PRIAS liquid scintillition counter PL) mérjük, 1,0 ml mintához 5 ml szcintillációs folyadékot adunk. 15 Az eljárást részletesen Kämmerer fentebb idézett cikkében ismertetik. A hím patkányok májszövetének protein-sz ntézisére vonatkozó mérések eredményeit 4 hetes, naponta ismételt szubkután kezelés zu után az 1. táblázatban közöljük. A kezelt kontroll csoportnak szubkután fiziológiás nátrium-klorid-oldatot adtunk. Amint az 1. táblázat eredményeiből látható, a kezelt kontroll csőportban a protein- 25 -sz ntézis aktivitása 13,6 %-kal csökkent, a kezeletlen kontroll csoporthoz viszonyítva. Ez a különbség statisztikailag is bizonyítható. A protein-szintézis mértéke az 1. és 2. példa szerint előállított (1) általános képletű vegyü- 30 letekkel kezelt állatok esetén lényegesen eltér' a két kontroll csoport esetén kapott értékektől. A protein-szintézis mértékének növekecése arányos volt a dózisokkal. 1. táblázat: Patkányok máj szövetének protein-szintézise Vegyület Dózis (ng/kg) CPM (beütés/ perc) %-os különbség kontrolihoz képest kezeletlen kezelt 1, példa szerinti 10 14072 + 17,7 +36, 1 vegyület (TK7) 50 15093 +26,2 +46,0 100 16180 +35,3 +56,5 2. példa szerinti 10 13377 + 11 ,8 +29,4 vegyület (TK7D) 50 14280 + 19 ;4 +38,2 100 16866 +41,0 + 63,2 Kezeletlen kontroll — 11958 — — Kezelt-10336-13,6-kontroll Az (I) általános képletű vegyületek endokrinológiai aktivitással — például prolaktin és luteinizáló hormon felszabadító hatással — is rendelkeznek. Ezenkívül központi idegrendszeri hatásuk — közelebbről szedatív-hipnotikus hatásuk — is van. Patkányokban a spontán aktivitás csökkenését és a természetes alvást indukálják. Az (I) általános képletű vegyületeket vagy a belőlük előállított készítményeket bármely, önmagában ismert takarmánnyal együtt alkalmazhatjuk. 3 55 Takarmány alatt bármely állati élelmezésre alkalmazott eledelt értünk. Az (I) általános képletű vegyületeket vagy az azokat taraimazó készítményeket előnyösen alaposar összekeverjük a takarmánnyal,az egyen- 60 letts eloszlás biztosítására. A találmány szerint eljárással előállított vegyületeket bárme'y állati élelmezésre használt takarmánnyal keverhetjük, a végterméket úgy formáljuk, hogy az állati élelmezéshez szükséges alap- 55 vető tápanyagokat, ásványi anyagokat, vitamirokat, salakképző anyagokat, stb. tartat-
