193266. lajstromszámú szabadalom • Eljárás alfa-glaktozidázt termelő, de invertázt nem termelő mikroorganizmus előállítására
(19) HU MAGYAR NÉPKÖZTÁR8ASÁG ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS (22) A bejelentés napja: 82. 06. 03. (21) 1796/82 (33) DE: (32) 81. 06. 04. (31) P 31 22 216.1 (41) (42) A közzététel napja: 1984. 04. 30. (45) Megjelent: 1988.07.25. 193266u3)B (51) Int.Cl4 C 12 N 15/00; C 12 N 9/40; C 12 P 19/ 14 Szabada'mi Tár. ' ^) * -ÍVŰ, JDONÍ^_ (72) Feltalálók: dr, MATTES Ralf, Oberhausen, dr. BEAUCAMP Klaus, Tutzing, DE (73) Szabadalmas: Boehringer Mannheim GmbH., Mannheim-Waldhof, DE (54) ELJÁRÁS ALFA-GALAKTOZIDÁZT TERMELŐ, AZONBAN INVERTAZT NEM TERMELŐ MIKROORGANIZMUS ELŐÁLLÍTÁSÁRA (57) KIVONAT A találmány tárgya eljárás kofaktorokat nem igénylő, alfa-galaktozidázt konstitutívan termelő, invertázt azonban nem termelő mikroorganizmus előállítására, oly módon, hogy egy alfa-galaktozidáz gént tartalmazó, E. coli eredetű DNS-t és egy, a transzformálandó sejtekbe bevihető vektort amely antibiotikum rezisztencia géneket tartalmaz, Sal I. restrikciós endonukleázzal teljesen elbontunk, az alfa-galaktozidáz gént tartalmazó DNS fragmentumai közül elkülönítjük a 4 megadalton körüli relatív molekulasűlyú hasadási terméket, ezt bevisszük az ugyancsak Sál I.-gyel elbontott vektor oldatába és DNS-ligáz jelenlétében rekombináljuk egy rekombináns DNS keletkezése mellett, a kapott rekombináns DNS-t kompetenssé tett sejtekkel inkubáljuk a rekombináns DNS-nek a sejtekben való transzformációja érdekében, a transzformált sejteket egyetlen szénforrásként raffinózt tartalmazó táptalajon tenyésztjük, a képződött antibiotikum-rezisztens telepeket elkülönítjük és lízisnek vetjük alá, a lizátumból elkülönítjük a plazmid-DNS-t, azt Hind III. vagy Eco I. restrikciós endonukleázzal elbontjuk, a kapott oldatot hígítjuk és DNS-ligázzal kezeljük, a kapott renaturált plazmidot ismét bevisszük a kompetenssé tett sejtekbe, a transzformált sejteket ismét egy szénforrásként raffinózt, valamint antibiotikumokat tartalmazó táptalajon tenyésztjük, és elkülönítjük a képződött, raffinózt nem hasznosító telepeket.
