193213. lajstromszámú szabadalom • Eljárás AAD 216 antibiotikum-komplex és fő komponensei előállítására kibdelosporangium aridum-mal történő fermentálássla
11 193213 12 nomycetaceae nemzetségekben, valódi spórazsákocskák, amelyek érett állapotban aplanospórákat vagy zoospórákat tartalmaznak, amely spórák a sporangium falának feloldódásakor vagy elroncsolódásakor kiszabadul- 5 nak. Számos kísérlet és beható megfigyelés ellenére sem sikerült soha észlelni ezzel szemben azt, hogy a K- aridum sporangium-szerű szerkezeteiből spórák váltak volna szabaddá. Ha a sporangium-szerű testeket agarra he- 10 lyezzük, azok egy vagy több csíracsövet eresztve közvetlenül sarjadzanak. A leírásban jellemzett ATCC 39323 törzset tehát egy új nemzetség, a Kibdelosporan- 15 gium egy fajának tekintjük (a név a görög kibdelos = hamis, megtévesztő; a görög spóra = csíra és a görög angium — edény szóból származik), a fajjelölő szó, azaridum (aridus, latin szó, jelentése száraz) a sivatagos ta- 20 lajra utal, ahonnan a mikroorganizmust izoláltuk. Az AAD 216 komplexet a találmány értelmében úgy állítjuk elő, hogy egy Kibdelos- 25 porangium törzset — amely az ATCC 39323 törzs jellemzőivel rendelkezik, vagy annak egy aktív mutánsátyvagy származékát, melyet önmagában ismert módon állíthatunk elő — merített tenyészetben aerob körülmények között 30 vizes táptalajban tenyésztjük. A mikroorganizmus asszimilálható szénforrást, például asszimilálható szénhidrátot tartalmazó tápközegben tenyészthető. Szénforrásként használhatunk például szacharózt, laktózt, mai- 35 tózt, mannózt, fruktózt, glükózt, és oldódó keményítőt. A táptalajnak egy asszimilálható nitrogénforrást is tartalmaznia kell, például hallisztet, peptont, szójabab-lisztet, földimogyoró-lisztet, gyapotmag-lisztet vagy kukori- 4C calekvárt. A mikroorganizmus szaporodásához szükséges szervetlen sókat is biztosítanunk kell a táptalajban. Szervetlen sóként bármely olyan sót használhatunk, amely nátrium-, kálium-, ammonium-, kalcium-, fősz- 45 fát-, szulfát-, klorid-, bromid-, nitrát-, karbonát- és egyéb hasonló ionokat képes szolgáltatni. Az AAD 216 komplex előállítását olyan hőmérsékleten kell végezni, amelyen a mikroorganizmus megfelelő mértékben képes szaporodni, például 15 és 42°C közötti hőmérséklettartományban. A fermentálást célszerűen 25 és 28°C között végezzük. A tápközeg rendszerint semleges kémhatású, a pH értéke 5,0 és 9,0 között változhat, az éppen használt táptalajtól függően. A fermentálást . Erlenmeyer-lombikban, vagy laboratóriumi illetve ipari fermentorban végezhetjük, különböző térfogatokban. Abban az esetben, ha tartályban végezzük a fermentálást, először előnyösen valamilyen táptalajban vegetatív inokulumot készítünk, oly módon, hogy kis térfogatnyi táptalajt beoltunk az organizmus élő sejtjeivel. A fenti módon kapott inokulumot aszeptikus körülmények között bevisszük a tartály-fermentorba, ahol azután az antibiotikumot ipari méretben állítjuk elő. Az inokulum előállítására ugyanazt a táptalajt használhatjuk, mirtt amelyben a nagyobb léptékű fermentálást végezzük, de használhatunk attól eltérő táptalajt is. A táptalajon steril levegőt buborékoltatunk keresztül, mint az az aerob merített tenyészetek esetén általában szokásos. A keverést a fermentációs iparban általában használt keverőkkel biztosítjuk. Általában az AAD 216 komplex optimális termelését 144-186 óra inkubálássa! érhetjük el, keverős-üveg vagy tartáiy-fermentorban. A fermentáció lefolyását analitikai nagynyomású folyadékkromatográfiás eljárással követhetjük nyomon. A fenti módon kapott AAD 216 komplexben lévő új bioaktív komponensek vagy egyes antibiotikumok, az AAD 216A, AAD 216B és AAD 216C a fentebb már ismertetett módon izolálhatok. Az AAD 216 komplex, a dúsított AAD 216 komplex, az AAD 216A, AAD 2l6B, AAD 216C és vankomicin in vitro minimális gátlási koncentrációját számos mikroorganizmus esetén meghatározzuk, a szokásos mikrotiter eljárással. Az eredményeket az A-E. táblázatokban adjuk meg. A. táblázat: Antibakteriális hatásspektrum Mikroorganizmus Minimális gátlási koncentráció ( /íg/ml) AAD AAD AAD AAD Vanko-216 216 216 216 micin komplex A B C Staph, aureus HH127 6,3 3,1 3,1 1 ,6 1 ,6 Staph aureus SKandF 12,5 3,1 3,1 3,1 1 ,6 910 Strep, faecalis 1,6 0,4 0,4 0,8 3,1 HH34358 Proteus mirabilis >100,0 >100,0 >100,0 >100,0 100,0 SRandF 444 7
