193213. lajstromszámú szabadalom • Eljárás AAD 216 antibiotikum-komplex és fő komponensei előállítására kibdelosporangium aridum-mal történő fermentálássla
7 193213 8 Az AAD 216A-t, AAD 216B-t és AAD 216C-1 külön-külön 6 n sósavoldattal 18 órán át visszafolyató hűtő alatti forralással teljesen elhidrolizálva nem kapunk természetes aminosavat, standard aminosav-analízissel kimutatható mennyiségben. A vankomicin-csoportba tartozó antibiotikumokban szokásosan előforduló áktinoidinsav jelenlétét a hidrolízistermékek nagynyomású folyadékkromatográfiás és FAB tömegspektrometriás elemzésével mutattuk ki, autentikus mintával összehasonlítva. Az AAD 216A, AAD 216B és AAD 216G 1 n sósavoldatban 4 óra alatt, visszafolyató hűtő alatti forralással kapott hidrolizátumában mannózt találtunk, míg risztózamint, glükózamint vagy vankózamint nem tudtunk kimutatni. A Kibdelosporangium aridum SKandFAAD 216 (ATCC 39323) törzset híg burgonyás-sárgarépás vagy zablisz-agaron tartjuk fenn. A morfológiai vizsgálatokat vizes agar-lemezen, híg burgonyás-sárgarépás agar-lemezen, zabliszt-agar-lemezen vagy talaj-extraktum-agar-lemezen végezzük. A biokémiai és fiziológiai vizsgálatok céljára az alábbiak szerint készítünk inokulumot: csőben lévő lefagyasztott élő tenyészetet glükóz-élesztőkivonat táptalajt tartalmazó lombikba viszszük, majd rotációs rázógépre helyezve 28°C-on 250 fordulat/perc sebességgel 3-6 napon át rázatjuk. A tenyészetet centrifugáljuk, és steril desztillált vízzel háromszor mossuk. A biokémiai és fiziológiai vizsgálatok során az inkubálást 28°C-on végezzük, A szilárd táptalajokon végzett vizsgálatok eredményeit különböző időpontokban, a 21. napig olvassuk, le. A folyékony táptalajokkal végzett vizsgálatok eredményeit különböző időpontokban, egészen a 28. napig olvassuk le. Azonban a karbamid, allantoin és hippurát lebontási vizsgálatakor, valamint a nitrátok redukciójának vizsgálatánál 6 héten át olvassuk le az eredményeket. A K. aridum különböző antibiotikumokkal szembeni érzékenységét úgy határozzuk meg, hogy K. aridum tenyészettel felül rétegezett táptalaj agar-lemezre helyezzük a különböző antibiotikumokkal átitatott korongokat (BBL érzékenységi korong). A K. aridum morfológiailag a fonalas mikroorganizmusok közé tartozik, amely kétféle differenciálódásra képes micélmmokat képez: 1) szubsztrát mícéliumot, amely a táptalaj agarba behatolva az agar felületén tömör réteget képez, vagy 2) lég-micéliumot, amely konidium-láncokat és/vagy sporangium-szerü szerkezeteket hordoz. A lég- vagy szubsztrát micéliumokban nem észlelhetők mozgásra képes elemek. Sok tápközeg esetén a K- aridum jellegzetes kristályokat képez az agarban. A K. aridum jól fejlett szubsztrát micéliumokat termel, amelyek rendellenesség nélkül fragmentálódhatnak. A hosszú, elágazó hifák válaszfalasak, és 0,4-1,0 pm átmérőjűek. A szubsztrát micéliumon közös szárból szerteágazó, villásan elágazó, válaszfalas tufákból álló specializálódott szerkezetek találhatók. A K. aridum lég-micéliuma pálcika alakú, simafalú spórákból álló, változó hosszúságú láncokat termel (0,4 pm x 0,8-2,8 pm). A spóraláncok rendszerint igen hosszúak, több, mint 50 spórából állnak, de néhány rövid, legfeljebb 10 spórából álló lánc is rendszerint jelen van. A spóraláncok a csúcson, vagy rövid oldalláncokon képződhetnek. A legtöbb táptalajon a K- aridum lég-micéliuma sporangium-szerü szerkezeteket is képez. Ezek a csúcson, vagy rövid oldalláncokon képződhetnek. Ugyanazon a lég-hifán képződhet sporangium-szerü szerkezet és spóralánc is. A fenti érett sporangium-szerü szerkezetek kerek, kb. 9-22 pm átmérőjű képződmények, amelyek jól definált fallal körülvett amorf mátrixba ágyazott válaszfalas, elágazó tufákból állnak. Ha a sporangium-szerü testeket agarra helyezzük, azok egy vagy több csíracsövet eresztve közvetlenül sarjadzanak. K. aridum kemotaxonomiája A K. aridum tisztított sejtfal-preparátuma Becker [Appl. Microbiol. 12, 421-423 (1964)] módszere szerint elemezve a 2,6-diamino-pimelinsav mezo-izomerjét, alanint, glutaminsavat, glükózamint és murámsavat, valamint galaktózt, és igen kis mennyiségben arabinózt tartalmaz. A Leshevalier [J. Láb. Clin. Med. 71, 934-944 (1968)] módszere szerint analizált teljes sejt hidrolizátum galaktózt, glükózt, mannózt, ribózt, ramnózt és arabinózt tartalmaz; m'aduróz is jelen lehet, nyomnyi mennyiségben. A lipidtartalom szempontjából analizált sejt-extraktumokban semmilyen típusú mikolsav nem található, Lechevalier és munkatársai [Can. J. Microbiol. 19, 965-972 (1973)] módszere szerint végezve a vizsgálatot. A foszfolipidek közül foszfatidil-etanolamin, foszfatídil-metil-etanolamin, diíoszfatidil-glicerol, foszíatidil-inozitol és foszfatidil-inozitol-mannozidok vannak jelen. A fentiek szerint a K. aridum IV. típusú sejtfallal rendelkezik, A típusú teljes cukor-öszszetétellel, maduróz nyomokkal [Lechevalier és munkatársai: Int. J. Syst. Bacteríol. 20, 435-443 ( 1970) ], és PH típusú foszíolipid-öszszetétellel, foszfatidil - metil - etanolaminnal (Lechevalier és munkatársai: Biochem. System. Ecol. 5, 249-260 (1977)]. K. aridum fiziológiai és biokémiai jellemzői A K. aridum Gram-pozitív, nem savállóan festődő mikroorganizmus. Anaerob körülmények között nem szaporodik. 15 és 42°C közötti hőmérséklettartományban szaporodik, kis mértékben 45°C-on is nő. A szaporodás 10°C-on esetleges. 50°C-on egyáltalán nem szaporodik. Hidrogén-szulfidot termel. A tejet peptonizálja. A zselatint hídrolizáIja és befolyósítja. A nitrátot nem redukálja nitritté. A ka-5 5 10 15 20 25 30 35 4G 45 50 55 60 65
