193085. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új, feniléncsoportot tartalmazó spegualin-származékok és ilyen vegyületeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
13 193085 14 2i_táblázat A tálálmány szerinti vegyületek százalékos maradványa vizes oldatban Vegyület (példa száma) 0 12 I d 24 ő (óra) 48 72 120 168 1. 100 99,8 99,6 99,8 99,5 99,6 99,5 2. 100 99,7 99,9 99,8 99,9 100 99,8 3. 100 99,6 99,5 99,8 99,6 99,6 99,8 4. 100 99,6 99,9 99,6 99,7 99,9 99,5 5. 100 99,9 99,6 99,6 99,9 99,6 99,8 6. 100 99,5 99,8 99,7 99,7 99,5 100 7. 100 99,6 99,6 100 100 99,9 99,7 8. 100 99,7 99,9 99,5 98,8 99,7 99,8 9. 100 99,8 99,8 99,7 100 99,5 99,6 gpergualin 100 94,6 90,8 84,6 78,5 69,9 65,1 2. A találmány szerinti eljárással előállított vegyületeknek L 1210 egér leukémia ellen in vitro kifejtett gátló hatása (1) Kísérleti módszer DBA /2 törzsbe tartozó nőstény egerek hasüregébe M05/0,2 ml arányban L 1210 leukémia sejteket transzplantálunk. 4 nappal később mintát veszünk a hasüregi folyadékból, majd centrifugáljuk a növekedő L 1210 sejtek elkülönítése céljából. Ezeket a sejteket azután hozzáadjuk borjúembriószérummal és 2-merkapto-etanollal adalékolt RPMI 1640 táptalajhoz. A táptalajt azután hígítjuk, az L 1210 sejtek olyan szuszpenzióját kapva, amelynek végső koncentrációja 5 ■ 104 sejt/0,9 ml. Mindegyik találmány szerinti vegyületet feloldjuk az előbb említett táptalajban, majd 0,062 pg/ml és 100 pg/ml közötti koncentrációjú oldatokat készítünk. Petri-csészében az L 1210 sejtszuszpenzió 0,8 ml térfogatú részét 0,1 ml kísérleti oldattal elegyítjük, majd a kapott keveréket szén-dioxid atmoszférában 37°C-on 48 órán át inkubáljuk. A sejtszámot megállapítjuk mind inkubálás előtt, mind inkubálás után és az L 1210 sejtek növekedésének 50%- os csökkenéséhez szükséges koncentrációt /IC50/ kiszámítjuk. (2) Kísérleti eredmények -A 3. táblázatban megadjuk a találmány szerinti eljárással előállított vegyületek közül néhány jellegzetes vegyület IC50 értékében kifejtett gátló hatását az L 1210 egér leukémiái sejtjei növekedésének gátlásában. 3i_táblázat Az L 1210 egér leukémia sejtjeinek in vitro gátlása Vegyület/a példa ICW sorszáma (pg/ml) 1,1 0,92 0,97 A 3. találmány szerinti eljárással előállított vegyületeknek az L 1210 egér leukémia el- 25 lenében kifejtett élettartamnövelő hatása és toxícitásuk (1) Kísérleti módszer CDF 1-SLC törzsbe tartozó nőstény egerek 6 — 6 egyedből álló csoportjainak hasüregébe 1 • 105 sejt/0,2 ml arányban L 1210 leukémia sejteket transzplantálunk. Két találmány szerinti vegyületből külön-külön fiziológiás konyhesóoldattal különböző koncentrációjú hígításokat készítünk, majd a transzplantációt kö- 3(. vető naptól kezdve 9 egymást követő napon át mindegyik hígítást napi 0,1 ml/10 g (testsúly) arányban beadjuk. A kontrollcsoportnak csak fiziológiás konyhasóoldatot adagolunk. Az L 1210 sejtek transzplantációját követő 4q naptól kezdve 30 napon át az egereket megfigyeljük, és a mindegyik egér által túlélt napszámot átlagoljuk, hogy megkapjuk mindegyik kezelt csoportra az átlagos túlélési időt. Ezt az átlagszámot osztjuk a kontrollcsoport ádagával és az eredményt százzal szorozva 4E> kapjuk a százalékos élettartamnövekedést. (T/C). A 125-nél nagyobb T/C értékeket tekintjük hatásosnak. A 4. táblázatban megadjuk néhány jelleg- 5Q zates találmány szerinti vegyület élettartamnövelő hatását, azaz T/C értékét az L 1210 egér leukémiával szemben. 4_1_táb lázat 55 L 1210 egér leukémia elleni élettartamnövelő hatás Vegyület Dózis T/c (a példa (mg/kg/nap) (%) er« sorszáma) 1 2 3 0,00 100 50.00 25.00 8 ’ 4, 7. 8. 65 Kontroll 178
