193051. lajstromszámú szabadalom • Eljárás nisztatin előállítására új streptomyces törzzsel
maolajat használunk. A fermentáció végén az 1. példában leírt biológiai és kémiai vizsgálatokat elvégezve azt találtuk, hogy a fermentlé nisztatin tartalma 92400 E/ml. 5. példa A Streptomyces noursei ssp. albidus NXO-9 jelű törzzsel mindenben a 4. példa szerint járunk el, de a fermentáció folyamán, a 36. és a 60. órában 80 illetve 120 g glükózt adagolunk a fermentléhez steril vizes oldat formájában. A fermentációt 6 napig folytatjuk. A fermentáció végén az 1. példában leírt biológiai és kémiai vizsgálatokat elvégezve azt találtuk,hogy a fermentlé nisztatin tartalma 114200 E/ml. 6. példa A Streptomyces'noursei ssp. albidus NXO-9 jelű törzzsel mindenben a 4. példa szerint járunk el, de fermentációs táptalajként a következő összetételt használjuk: 1 szójaliszt 64 g kukoricaliszt 560 g ammóniumszulíát 32 g kalciumkarbonát 40 g nátriumklorid 16 g trinátriumfoszfát 3,2 g pálmaolaj 32 g víz 8000 ml A fermentációt 5 napig folytatjuk. A fermentáció végén az 1. példában leírt biológiai és kémiai vizsgálatokat elvégezve azt találtuk, hogy a fermentlé nisztatin tartalma 87600 E/ml. 7. példa A Streptomyces noursei ssp. albidus NXO-9 jelzésű törzs 4. példa szerint előállított laboratóriumi inokulum tenyészetével /100 ml/ beoltjuk a következő összetételű steril táptalajt /5 m3 térfogatú előfermentorban/: kukoricaliszt 90 kg kukoricalekvár 60 kg /50%-os nedves/ ammóniumnitrát 12 kg káliumdihidrogén-íoszfát 3 kg kalciumkarbonát 30 kg nátriumklorid 6 kg pálmaolaj 15 kg víz pH=6,2-6,4 3000 1 Az üzemi oltóanyag előállításához 180 m3/óra levegőztetést alkalmazunk, a keverő fordulatszáma 180/perc, a hőmérséklet 28°C. Az ily módon, 28 óra alatt kifejlődött oltóanyagot beoltjuk egy 56 m3 térfogatú csöfermentorba, amely a következő összetételű steril táptalajt tartalmazza: szójaliszt 240 kg kukoricaliszt 2100 kg ammóniumnitrát 135 kg 2 kalciumkarbonát 150 kg nátriumklorid 60 kg trinátriumfoszfát 12 kg disznózsír 120 kg viz 30.0001 pH = 6,2—6,4 Az összeállított táptalajban 300 g alía-amilázzal elfolyósítjuk /80°C-on, 10 percig/ a keményítőt, majd 122—123°C-on sterilezzük 60 percig. A fermentációt 6 napig folytatjuk 28°C-on, 1800 m3/óra levegőztetés mellett. Habzásgátlóként — szükség szerint — disznózsírt alkalmazunk. A fermentáció befejezésével a fermentlé nisztatin tartalma 71300 E/ml. A fermentáció befejezésekor a 30.000 liter fermentléhez 96 kg foszforsavat adagolunk keverés közben, majd a pH-t nátriumhidroxiddal 7,0-7,2-re állítjuk. 3 órás keverés után a kezelt fermentlevet keretes szűrőpréseken szűrjük, vízzel mossuk. A csapadékot ezután összegyűjtjük és 2100 liter vízzel felszuszpendáljuk.majd a szuszpenziót porlasztva szárítón szárítjuk /180°C bemenő,105°C elmenő hőmérséklet mellett/. A szárított csapadék tömege 948 kg, 1850 E/mg a nisztatin tartalma, összesen tehát 1753,8 milliárd egység nisztatint kapunk, nyers nisztatin formájában. Ezután 370 kg nyers nisztatint /684,5 milliárd egység/2000 liter, 2% kalciumkloridot tartalmazó metanollal, majd 800 liter, 1% kalciumkloridot tartalmazó metanollal extraháljuk. A 30-30 perces extrahálás közben 25 kg aktív szenet adagolunk a szuszpenzióhoz, majd szűrjük, a szűrleteket egyesítjük. Szenes derítés után újra szűrjük az extraktlevet, ezután a szűrletre vonatkoztatott, 1,1-szeres térfogatú, ammóniumhidroxiddal pH='8;2—8,5-re állított ionmentes vízzel a nisztatint kicsapjuk. 8 órai állás után a szuszpenziót szűrjük. A terméket először ionmentes vízzel mossuk, majd 200 1 ionmentes vizet, 400 kg acetont 2 kg dinátrium-hidrogénfoszfátot és 0,2 kg nátriumhexametafoszfátot tartalmazó eleggyel szuszpendáljuk és mossuk. Ezután 1000 kg acetonban a terméket felszuszpendáljuk, az acetonos szuszpenziót 30 percig forraljuk, lehűtés után szűrjük. Végül 500 kg acetonnal a végterméket mossuk, végül a terméket 16 órán át vákuum szárítószekrényben, 45°C-on szárítjuk és szítáljuk. Ily módon 98 kg, 5580 E/mg aktivitású, összesen 546,84 milliárd egység nisztatint kapunk. A kapott termék világossárgá, kristályos anyag, bomláspontja 160°C, optikai forgatóképessége: jégecetben —/0°, piridinben aíg*=+21°. Spektrális adatai: 1%-os metanolos oldatban az ultraibolya spektumban 231,280, 291,304, 318 nm-nél jellemző maximumai vannak. 193051 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6
