193039. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az A-21978C ciklusos peptid N-szubsztituált származékainak előállítására
193039 (d) Oldhatóság: vízben oldódik (e) Infravörös abszorpciós spektrum (KBr) maximumai: 3345 (széles), 3065 (gyenge), 2975 (gyenge), 2936 (gyenge), ~17l0 (vált), 1660 (erős), 1530 (erős), 1452 (gyenge), 1395 (közepes), 1368 (gyenge), 1341 (gyenge),1250 (közepes), 1228 (közepes), 1166 (közepes - gyenge) és 1063 (gyenge) cm -l (f) UV abszorpciós spektrum maximumai (90 % etanolban): 220 nm (e 42,000) és 260 nm (e 10,600) (g) HPLC retenciós idő = 6 min, 4,6 x x300 miri-es szilikagél/C,8 oszlopon, 0,2% ammónium-acetátot tartalmazó víz/acetonitril/ /metanol (80:15:5) oldószert használva 2 ml/ /min áramlási sebességgel, UV detektálással 5. preparálás A-21978C 1SL -t-BOC mag alternatív tisztítása A 4. preparálás C. fejezetében leírtak szerint kapott, flig tisztított A-21978C NoTM-t-BOC magot (10,8 g) vízben oldjuk és 80 ml Amberlite IRA-68 gyantát (acetát-ciklus; Rohm and Haas, Philadelphia, PA) tartalmazó oszlopra visszük fel. Az oszlopot vízzel mossuk és 5 ml/ /min áramlási sebességgel, egymás után 0,05n ecetsavoldattal (1080 ml), 0,ln ecetsavoldattal (840 ml) és 0,2n ecetsayoldattal (3120 ml) eluáljuk, 120 ml-es frakciókat gyűjtve. Az oszlop elúcióját analitikai HPLC-vel szilikagél/C,8 tölteten, 0,2% ammónium-acetátot tartalmazó víz/acetonitril/metanol (80:15:5) oldószerrendszert használva ellenőrizzük,és a terméket 254 nm-nél UV monitorral detektáljuk. A terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük; az oldat pH-ját piridinnel 5,8-ra állítjuk be; a kapott oldatot vákuumban mintegy 200 ml térfogatra bepároljuk. A koncentrátumhoz vizet adunk,és a kapott oldatot a piridin eltávolítása céljából ismét bepároljuk. A maradékból gyorshütéses szárítás után 3,46 g tisztított A-21978C Nfffn-t-BOC magot kapunk. 1-16. példa A 3 általános képletü vegyületek acilezése útján kapott különböző alkanoil- és alkenoilszármazékok előállítását — az 1 általános képletü vegyületek jellemző preparálását—az alábbi I. táblázat mutatja be. Az I. táblázatban szereplő származékokat vagy módosított Schotten-Baumann reakcióval állítjuk elő acilezőszerként savkloridot használva (A. módszer), vagy pedig az „aktív észter" eljárással, acilezőszerként 2,4,5-triklór-fenil-észtert alkalmazva (B. módszer). Az A. vagy B. módszerben a következő általános acilező eljárásokat alkalmazzuk: A. módszer /módosított Schotten-Baumann reakció/ Az eljárásban a 3 általános képletü magot (R', R° = H) a kívánt acil-oldalláncnak megfelelő alkán- vagy alkénsavkloriddal reagáttatjuk. 3 általános képletü vegyületet /1,95-2,16 g, 1,33-1,47 mmol/ vagy 2 általános képletü ve-15 gyületet /409 mg, 0,25 mmol/ 200 ml piridin/ /víz /9:1 / elegyben oldunk. Az acilezőszert /18-20 mmol feleslegü savklorid 15 ml acetonban oldva/ cseppenként, 1-3 óra alatt adjuk hozzá, és az elegyet környezeti hőmérsékleten még 2-3 óráig keverjük. A reakciókevéréket bepároljuk az aceton eltávolítása céljából. A visszamaradt vizes fázist vízzel körülbelül 200 ml térfogatra hígítjuk. Az oldat pH-ját jégecettel 3,0-3,5-re állítjuk be. Az oldatot 8x mossuk azonos térfogatú dietil-éterrel, majd lioíilizáljuk. A nyers acilezett származékot fordított fázisú HPLC-vel tisztítjuk a következőképpen: a vízben vagy az eluens rendszerben /körülbelül 4-6,5 ml/ oldott mintát LPj/C^ adszorbenssel megtöltött 83 x 1,6 cm-es rozsdamentes acéloszlopra injektáljuk. Az oszlopot Hp/MeOH/CH-jCN/piridin/HOAc oldószerrendszerrel eluáljuk. Az elúciót körülbelül 10350 — 13800 kPa nyomáson, mintegy 10- -12 ml/min áramlási sebességgel, kétdugatytyús LDC pumpát /Milton Roy/ használva hajtjuk végre. Az effíuenst 280 nm-nél UV detektorral /ISCO-UA-5/ detektáljuk. A kívánt frakciókat egyesítve és vákuumban szárazra párolva a kívánt alkanoilszármazékhoz jutunk. A tisztított terméket TLC.-vel elemezzük fordított fázisú lemezeket /Whatman KClg/ és H20/Me0H/CH3CN/piridin/H0Ac /45:15: 40:2:2/ oldószerrendszert használva. A lemezeket UV fény alatt vizsgáljuk a termék detektálása céljából. A termékeket UV abszorpciós spektrofotometriával /extinkciós koefficiensek 220 és 260 nm-nél/ és aminosav-analízissel elemezzük.A tisztaságot analitikai fordított fázisú HPLC-vel /C18 Microbondapak, Waters Co./ H20/MeOH/CH3CN/piridin/HOAc oldószerrendszert használva határozzuk meg, az eluenst 280 nm-nél UV monitorral detektálva. B. módszer /2,4,5-triklór-fenil „aktív észter” eljárás/ Ní,„-t-BOC-A-21978C magot /1,0 g, 0,64 mmol/, A-21978C magot /0,5-1,0 g, 0,34- -0,68 mmol/, vagy A-21978C-t /946 mg, 0,58 millimol/ és 3,5 mól feleslegü triklór-fenil-acil aktív észtert dimetil-íormamidban /100 ml/ oldunk, és szobahőmérséklet és mintegy 50°C közötti hőmérsékleten körülbelül 6-20 óráig keverjük. A reakciókeveréket vákuumban bepárolva olajat kapunk. Az olajat eldörzsöljük 50 ml Et20/toluol /1:1 / eleggyel és Et20-val mossuk. A mono- és diacilezett A-21978C mag-származékokat, acilezett A-21978C,-et és acilezett t-BOC-A-21978C magot az A. módszerben leírtak szerint tisztítjuk. Az acilezett LBOC-A-21978C magról a védőcsoportot lehasítjuk 50 mg/ml trifluor-ecetsav/anizol/trietil-szilán /10:1:1/ eleggyel kezelve 3-5 percig, mintegy -10° és 0°C közötti hőmérsékleten. A reakcióelegyet vákuumban bepárolva olaj képződik, melyet kétszer 20 ml Et20-val eldörzsölünk. A nyers acilezett terméket fordított fázisú HPLC-vel tisztítjuk és az A. módszernél leírtak szerint elemezzük. A következő I - X. táblázatban felsorolt példák vegyületei 1 általános képletüek. 16 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
