193039. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az A-21978C ciklusos peptid N-szubsztituált származékainak előállítására
193039 hozzáadjuk a mikroorganizmus tenyészetéhez. A „védett A-21978C faktorok” és a„védett A-21978C komplex" meghatározás olyan egyedi A-21978C faktorokra vagy a faktorok keverékeire /komplex/vonatkozik, ahol az ornitin és/vagy kinureniri aminocsoportját amino-védőcsoport blokkolja. Előnyösen az amino-védőcsoport az egyedi faktor vagy a faktorkeverék ornitinrészének delta-aminocsoportján helyezkedik el. A tenyészetet a szubsztráttal addig inkubáljuk, amíg a dezaci leződés teljesen végbemegy. A kapott megfelelő A-21978C ciklusos peptidet a fermentléből ismert módon különítjük el. Az enzimatikus dezacilezéssel kapott ciklusos peptidek és sóik a 3 általános képlettel írhatók le, ahol R' és R° egymástól függetlenül hidrogénatomot vagy aminovédőcsoportot jelent. Az A-21978C komplex vagy az A-21978C komplex egyes C0l C,, C2, C3, C4 és C5 faktorának acilrészét eltávolítva 3 általános képletü vegyületet kapunk, ahol R° és R’ hidrogénatomot jelent. A dez^cilezett molekula az A-21978C antibiotikum faktorok mindegyikében meglévő közös ciklusos peptid. Kényelmi okból e vegyületet A-21978C magnak fogjuk nevezni. E vegyület a 4 képlettel is leírható,’ melyben „3MG” L-treo-3-metil-glutaminsavat jelent. A 3 általános képletü vegyületeket, melyekben R° és R’ hidrogénatomtól eltérő jelentésű, a megfelelően védett antibiotikus A-21978C C0, C,, C2, C3, C4 és C5 faktorok dezacilezésével állítjuk elő. Kényelmi okokból itt e vegyületeket védett A-21978C magoknak fogjuk nevezni. E védett vegyületek hasznos köztitermékek egyes 1 általános képletü peptidek előállításához, azaz olyan vegyületekéhez, melyekben R1 és R2 közül legalább az egyik szubsztituens amino-védőcsoportot jelent. A szakember előtt nyilvánvaló, hogy az A-21978C mag és a blokkolt A-21978C mag akár szabad amin, akár savaddíciós só formájában előállítható. Noha bármilyen alkalmas savaddíciós só használható, előnyben részesítjük a gyógyszerészetileg elfogadhatókat. „Gyógyszerészetileg elfogadható" sók azok, amelyek melegvérű állatok kemoterápiájában alkalmazhatók. A 3 általános képletü mag előállításának módszerét, melynél különböző mikroorganizmusokat használunk, részletesen ismertetjük a T/30.775 sz. magyar nyilvánosságrahozatali iratban. Az előnyben részesített dezacilező enzimet, az A. utahensis NRRL 12052-t az „Agricultural Research Culture Collection /NRRL/, Nothern Regional Research Center, U.S. Department of Agriculture, 1815 North University St., Peoria, Illinois 61604, U.S.A.” bocsátja a nyilvánosság rendelkezésére NRRL 12052 nyilvántartási számmal. Az itt leírt 1. preparálás az A-211978C mag fermentációs előállítását ismerteti, melynek során szub-3 sztrátként A-21978C komplexet és mikroorganizmusként Actinoplanes utahensis NRRL 12052-t használunk. A 3 általános képletü A-21978C mag előállítására használható egyéb Actinoplanaceae tenyészetek a nyilvánosság részére a Nothern Regional Research Laboratory-ból állnak rendelkezésre, a következő nyilvántartási számokon: 4 Actinoplanes missouriensis NRRL 12053 Actinoplanes sp. NRRL 8122 Actinoplanes sp. NRRL 12065 Streptosporangium roseum var. hollandensis NRRL 12064 Az Actinoplanaceae családon belül valamely adott mikroorganizmus törzs dezacilező hatásosságát a következő eljárással határozzuk meg. Alkalmas táptalajt beoltunk a mikroorganizmussal. A tenyészetet rotációs rázógépen mintegy 28°C-on 2-3 napig inkubáljuk. Ezután a szubsztrát antibiotikumok egyikét hozzáadjuk a tenyészethez, a fermentációs közeg pH-ját körülbelül 6,5 értéken tartva. A tenyészet aktivitását Micrococcus luteus próbával mutatjuk ki. Az antibiotikus aktivitás csökkenése azt jelenti, hogy a mikroorganizmus termeli a dezacilezéshez szükséges enzimet. Ezt azonban a következő módszerek valamelyikével kell igazolni: 1/HPLC elemzés az ép mag jelenlétének kimutatására, vagy 2/ alkalmas oldallánccal /például lauroil-, n-dekanoil- vagy n-dodekanoilcsoport/ való újraacilezés az aktivitás visszaállítása céljából. A találmány tárgyát az A-21978C mag /3 általános képletü vegyület/, valamely A-21978C faktor, vagy blokkolt A-21978C faktor acilezése útján kapott, 1 általános képlettel leírható új vegyületek — ahol R, R1, R2, R3, R4 és R5 az előzőekben megadott — vagy e vegyületek gyógyszerészetileg elfogadható sóinak előállítása képezi. A 4-14 szénatomos alkilidén-csoport megjelölés a általános képletü csoportra vonatkozik, ahol R3 és R4 hidrogénatomot vagy 3-13 szénatomszámú alkilcsoportot jelent, azzal a kikötéssel, hogy R3 és R4 egyike hidrogénatomtól eltérő jelentésű legyen, ezenfelül az R3 és R4 szubsztituensek szénatomjainak összege ne legyen több 13-nál. Azokat a vegyületeket, melyekben az R, R1 vagy R2 szubsztituensek egyike 4-14 szénatomos alkilidén-csoportot jelent, Schiff-bázisokként ismertek. Ha az R csoport alkanoilcsoportot jelent, az alkilrész egyértékü telített, egyenes vagy elágazó láncú szénhidrogéncsoport. Ha R alkenoilcsoportot jelent, az alkenilrész egyértékű telítetlen, egyenes vagy elágazó láncú szénhidrogéncsoport, amely nem tartalmaz 3-nál több kettőskötést. A telítetlen szénhidrogénlánc kettőskötés-része/i/ cisz- vagy transz-konfigurációjdak lehetnek. Az „amino-védőcsoport” meghatározás olyan ismert amino-védőcsoportot jelöl, amely összeegyeztethető az A-21978C molekula más 3 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
