193008. lajstromszámú szabadalom • Eljárás benzotiazepinek előállítására
193008 77. példa 3<R>-|8 -Amino-1 (S)-karboxi-oktilamino| -4-oxo-2,3,4,f>-tetrahidro-l ,5-benzotia-zepin-5-ecetsav előállítása 0,35 g 3(R) - [8-amino-l (S)-etoxikarbonil-oktilamino] -4-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-l,5-benzotiazepin-5-ecetsav-di ( hi drogén-klór id ) -ot 10 ml 1 n vizes nátrium-hidroxid-oldatban oldunk, és az oldatot szobahőmérsékleten 30 percen át állni hagyjuk. Az oldathoz 2,5 ml ecetsavat adunk, és a kapott elegyet Amberlite XAD-2-vel töltött oszlopon kromatografálva tisztítjuk, az eluálást metanol és víz 1:2 arányú elegyével végezzük. 0,24 g címszerinti terméket kapunk, színtelen por formájában. [a]E =-141° (metanolban). SIMS-spektrum (m/e.): 424 (MH+). 1 kísérleti példa Az (1) általános képletű vegyületek gátló hatása az angiotenzin I-et átalakító enzimre (ACE) A kísérletet Cushman és munkatársai [Biochemical Pharmacology 20, 1637 (1971)] módosított eljárása szerint végeztük, az alábbi módon. Szubsztrátként hippuril-L-hisztidil-L-leucint (HHL) használva meghatároztuk az ACE-re kifejtett gátló hatást oly módon, hogy meghatároztuk az ACE által szabaddá tett hippursav mennyiségének %-os csökkenését az (I) általános képletű vegyületek jelenlétében. A találmány szerinti eljárással előállított vegyületeket 300 mmól/l nátrium-kloridot és 0,02—0,5/ dimetil-szulfoxidot tartalmazó 100 mmól/l-es borát-HClpufferoldatban (pH 8,3) oldottuk, és az oldathoz 100 pl ACE-t (20 mg/ml-es protein-koncentrátum) és 100 pl 1,25 mmól/l HHL-t.adtunk. A fenti kísérletben a borát-HClpufferoldat annyi dimetil-szulfoxidot tartalmazott, mint a kontrollként használt vizsgálati oldat. Az oldatot 37°C-on 1 órán át melegítettük, majd a reakciót 150 pl 1 n hidrogén-klorid-oldat hozzáadásával leállítottuk. Az oldathoz 0,8 ml etil-acetátot adtunk és 11500 fordulat/perc sebességgel 2 percen át centrifugáltuk. Az etil-acetátos fázisból vett 0,5 ml alikvotot 40°C alatti hőmérsékleten nitrogénáramban megszárítottuk. A maradékot 4,5 ml desztillált vízzel alaposan összekevertük, majd 228 nm-en kolorimetráltuk. A kísérleti eredményeket a 20. táblázatban adjuk meg. 20. táblázat 1 Vegyület Koncentráció ACE-inhi(példa (jümól/1) bitor száma) aktivitás (%) 5. 0,1 40 1 84 20. táblázat (foly.) 2 Vegyület (példa száma) Koncentráció (ju mó 1 /1 ) ACE-inhibitor aktivitás (%) 6. 0,1 48 1 85 7. 0,1 53 1 86 9. 0,1 83 1 95 12. 1 50 10 86 13. 0,01 46 0,1 91 50. 0,01 77 0,1 96 60. 0,1 82 1 98 69. 0,1 93 1 100 73. 0,1 96 1 100 2. kísérleti példa Afc (I) általános képletű vegyületek angiotenzin I vérnvomásnövelő aktivitását gátló hatása A kísérletben 250—350 g súlyú hím patkányokat (Spargue-Dawley) használtunk, amelyek tetszés szerinti ivóvizet és táplálékot kaptak. Az állatokat 50 mg/kg intraperitoneálisan adott nátrium-pentobarbitállal anasztetizáltuk a kísérletet megelőző napon, és a vérnyomásmérésre a combartériákba, az angiotenzin I és 11 beinjektálására pedig a combvénába polietilén-csövet illesztettünk. A csöveket rögzítettük. A kísérlet napján a kontroll fázisban elektramos vérnyomásmérővel (MPU-0,5-290-0- -III modell, gyártja a NEC-Sanei, Japán) meghatároztuk az átlagos vérnyomást, melyet 29 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
