192892. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 2,5-diketo-d-glükonsav-reduktáz előállítására
18 192892 19 6, táblázat A K-106 és T-13 törzsekből kapott 25DKG-reduktázok enzimaktivitásai és az enzimreakciók pH-értékei pH Enzim(relatív aktivitás aktivitás)* K-106 T-13 4.0 1 1 5.0 48 65 6.0 103 104 7.0 100 100 8.0 70 64 : 9.0 6 19 * Az aktivitást minden egyes pH-értéken azon az alapon definiáljuk , hogy az aktivitás = 100 7 pH-értéken és 30 °C-on. ! A fenti táblázatból látható, hogy mindkét törzsből származó 25DKG-reduktáz optimális pH-értéke 6-7. VII) Az aktivitás "3szefüggése a hőmér- 25 séklettel A K-106 és T-13 törzsekből kapott 25DKG-reduktázok aktivitását mérjük különböző hőmérsékleteken. A szubsztrátum Ca- 30 -25DKG, pH = 7. Az eredményeket a 7. táblázat szemlélteti. 7. táblázat A K-106 és T-13 törzsekből kapott 25DKG-reduktázok enzimaktivitása és a reakcióhőmérséklet 35 Hőmérséklet °C Enzimaktivitás K-106 (relatív aktivitás)* T-13 22 46 64 25 69 79 28 86 92 30 100 100 35 115 115 40 119 133 45 93 128 50 44 92 A 7. táblázat adataiból kitűnik, hogy a mindkét törzsből kapott 25DKG-reduktázok aktivitása minden esetben nő a hőmérséklettel 40 °G-ig és csökken, ha a hőmérsékletet 45 °C-ra vagy ennél magasabbra növeljük. Vili) Km-érlék Mindkét enzim Km-értékét mérjük 25DKG-ra, a K-106 és T-13 törzsekből kapott enzimek tisztított oldatait használva, így a Km-érték 1,7+1,0 minői, illetve 2,6±1,0 mmól. SZABADALMI IGÉNYPONT Eljárás 2, 5-diketo-D-glükonsav-reduktáz előállítására, amely a következő fizikai-kémiai tulajdonságokkal rendelkezik: (a) enzimaktivitás: redukált nikotinamid-adenin-dinukleotid-foszfát, mint koenzim jelenlétében katalizálja (i) a 2, 5-diketo-D-glükonsavnak vagy 3Óinak redukcióját 2-keto-L-gulonsavvá vagy megfelelő sóivá, és (ii) az 5-keto-D-fruktóz redukcióját L -szorbózzá, (b) fajlagosság a szubsztrátuinokra: 2, 5-diketo-D-glükonsavra és 5-keto-D-fruktózra, (c) optimális pH-érték: pH = 6-7, (d) pH-stabilitás: pH = 5-7, (e) molekulasúly: 29.000±2.000, (f) izoelektromos pont: pH = 4,4+0,3. azzal jellemezve, hogy Corynebacterium sp. 20A-77 (ATCC 31 090), Corynebacterium sp. T-13 (ATCC 31 089) vagy Corynebacterium sp. K-106 (ATCC 31 088) mikroorganizmust vagy mutánsát szén- és nitrogénforrást és szervetlen sókat tartalmazó tápközegben tenyésztjük, a kapott sejteket elroncsolva feltárjuk, majd a mikroorganizmus feltárt sejtjeiből a 2, 5-diketo-D-glükonsav-reduktázt centrifugálással, kisózással, dialízissel, ioncserélő-kromatografálással vagy affinitás-kromatografálással elkülönítjük. * lásd a 6. táblázatnál Rajz nélkül A kiadásért felel a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 88.391.66-4 Alföldi Nyomda Debrecen - Felelős vezető: Berikő István vezérigazgató 11
