192868. lajstromszámú szabadalom • Eljárás főleg aszthma elleni gyógyszerkészítmények előállítására
5 192868 6 Aktivált észterek, például ciano-metilészterek vagy p-nitro-fenilészterek reagáltatása esetén valamilyen tercier bázisból, például trietil-aminból vagy piridinből a hidroxil-aminra vonatkoztatva az ekvimoláris mennyiség legalább kétszeresét adjuk a reakcióelegyhez. A rővidszénláncú alkilészterek például alkálifém-naftolátok és halogénezett karbonsavészterek rővidszénláncú alkoholokban vagy aromás szénhidrogénekben végzett reagáltatása útján, vagy a megfelelő (IV) általános képletű sav észterezésével, vagy a megfelelő nitrilek alkoholízisével állíthatók elő. A kapott rővidszénláncú alkil-észterekből a szokásos módon, ammóniával végzett reagáltatással állíthatók elő a megfelelő amidok. Az új (I) általános képletű vegyületeket kívánt esetben szervetlen bázissal vagy fémsóval reagáltatva sóvá alakíthatjuk. Az új (I) általános képletű vegyületek sóit például alkálifém-hidroxidokkal, így nátrium-hidroxiddal vagy kálium-hidroxiddal, vagy alkáliföldfém-hidroxiddal, így kalcium-hidroxiddal, vagy a megfelelő alkálifémvagy alkáliföldfóm-halogenidekkel képezhetjük. Meglepő módon azt találtuk, hogy az ( ) általános képletű vegyületek kedvező gyógyászati hatást fejtenek ki. A vegyületek ezért a humán- és állatgyógyászatban a légzószervi asztma és egyéb allergia okozta betegségek, gyulladásos folyamatok és trombózis megelőzésére és kezelésére alkalmazhatók. A gyógyszerkészítmények hatóanyagaként! alkalmazás az (I) általános képletű vegyületek sóira is kiterjed. A készítmények előnyösen gyógyászatilag elviselhető sókat tartalmaznak. Az ilyen sókat előnyösen olyan bázisokkal képezzük, amelyeknek kationja az alkalmazott dózisban vagy semmilyen vagy kedvező gyógyászati hatást fejt ki. Előnyös továbbá, ha a hatóanyagként alkalmazása kerülő sók jól kristályosíthatok, és vagy nem vagy csak csekély mértékben higroszkóposak. Az (I) általános képletű vegyületek sóit például szervetlen bázisokkal, így vizes vagy vizes/alkoholos alkálifém-hidroxid-oldatokkal képezhetjük. Ahogy már említettük, az (I) általános képletű vegyületek értékes gyógyászati hatásokat, különösen asztma elleni, allergia elleni, gyulladásgátló és trombózis elleni hatást fejtenek ki. Állatkísérletben a vegyületek a tengerimalac kipreparált tüdőcsíkján kifejezetten erős asztma elleni hatást mutattak. A vizsgálatot az irodalomból ismert, módosított eljárások szerint végeztük fJ. M. Drazen et al., J. Clin. Invest. 63 1 (1979); M. W. Schneider és J. M. Drazen, Amer. Rev. Resp. Dis. 121, 835 (1980); S. S. Yen és W. Kreutner, Agents Actions 10, 274 (1980); S. S. Yen, Prostaglandins 22, 183 (1981)1. A tengerimalac tüdejéből nyert preparátumon az (I) általános képletű vegyületek az. arachidonsav indukálta broncho-konstrikció (kiváltva 1,5.10'5 mól arachidonsawal) szignifikáns gátlását eredményezték (lásd 6. példa). Ez a hatás változatlanul megmaradt, sőt olykor felerősödött akkor is, amikor a ciklooxigenáz enzimet gátló anyagot adagoltunk a mérési rendszerhez. Ez az eredmény minden kétséget kizáróan arra enged következtetni, hogy az (I) általános képletű vegyületek az arachidonsav hasznosulásában a lipoxigenáz utat gátolják, és a fent leírt gyógyászati hatás ezen a mechanizmuson alapul. Ezt a következtetést házinyúl retikulocitákból előállított nagytisztaságú lipoxigenáz vizsgálatával közvetlenül sikerült alátámasztani (lásd 7. példa). A házinyúl retikulocitákból nyert lipoxigenázt az irodalom ismert módon (S. M. Rapoport et al., Methods in Enzymology, 71, 430 (1981)1 elektroforetikusan és immunológiai szempontból tiszta formában nyertük. A lipoxigenáz aktivitást 25 °C-on, az oxigén-fogyasztás Clark-elektródával szabvány rendszerben végzett polárográfiás mérésével határoztuk meg. Az (I) általános képletű vegyületek 10"* M végkoncentrációban az enzimaktivitást teljesen gátolták. A szubsztrátum koncentrációjának változtatásával és titrálásával a koncentráció-gátlás kallibrált görbéjét, majd abból a gátló koncentrációkat (I-értékeket) határoztuk meg. A 2-hidroxi-l-naftil-hidroxámsav Iso-értéke például 1,6 jumól, a 2-{2’-2’-naftiloxi)-acetohidroxámsavé 2,5 pmól, és a 2-(2’-naftiloxi)-2-n-nonil-íicetohidroxémsavé 1,5 p mól. Ezekkel az értékekkel a találmány szerint előállítható vegyületek meghaladják az újabb irodalom szerint legerősebb lipoxigenáz-gátló antiasztmatikum, a BW 755C T=3- -amino-N-(3’-trifluormetil-fenil)-2-pirazolinl hatását, amelynek azonos kísérleti körülmények között az Iüo-értéke 20 pmól volt. Tekintettel arra, hogy az új hatóanyagok hatásának molekuláris helyeként a lipoxigenáz enzim gátlását azonosítottuk, a trombociták aggregációjára kifejtett hatásukat is vizsgáltuk. A lipoxigenáz út - mint ma már tudjuk - lényeges szerepet játszik a trombociták agg regulásának visszafordíthatatlanságában (C. E. Dutilh et al., Prostaglandins and Medicine 6, 111 (1981)1. A trombociták aggregációjának visszafordíthatatlanságát trombózisos megbetegedések patogenézisében kulcsfontosságúnak tartják. Ezért rendkívül jelentős az az eredmény, miszerint az (I) általános képletű vegyületek trombociták aggregációját a kísérleti körülményektől függően teljesen gátolják, illetve reverzibilissé teszik (lásd 8. példa). A kísérletekben a trombociták aggregációját arachidonsavval vagy a lemezkéket aktiváló tényezővel (PAP-Acether) váltottuk ki. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 4
