192864. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új lipopeptidek előállítására
5 192864 6-szorosig terjedő mértékben stimulálják in vitro a timidinbeépülés által meghatározott B-limfocita-burjánzást egérnél, míg az említett európai szabadalmi leírásban szereplő vegyületek esetén ez csak 0,5 pg/ml dózisnál valósul meg és a stimulálás mértéke csak 20- -50-szerese a kontroli-értéknek. Az új lipopeptidek már olyan koncentrációkban is hatásosak, amelyekben az eddig ismert B-sejtmitogének (például a tisztított protein-szál— mazékok = PPD = purified protein derivative, vagy az Escherichia coli lipoprotémje és lipopoliszacharidja) még semmiféle hatást nem mutatnak. Ezenkívül ezek a vegyületek képesek aktiválni a patkány- és egér-alveolarmakrofógokat in vitro úgy, hogy ezek 24 órás inkubálás után az anyaggal tumorsejteket el tudnak pusztítani. Amennyiben ezeket a vegyületeket lipoBZomékba (multilamellás hólyagocskákba) bekebelezve az alveolarmakrofágokhoz adjuk, akkor ezek már 0,2 /ug/0,2 ml tenyészetnél képesek indukálni a tumoricid makrofágokat, míg az említeti európai szabadalmi leírásban leírt vegyületek ezt csak 10- -szer nagyobb dózis esetén képesek elérni. In vivo kísérleteknél is nagyfokú biológiai aktivitást mutatnak a találmány szerinti eljárással előállítható (1) általános képletű vegyületek. NMRI egereket 10 jug szarvasmarha szérumalbumin (BSA) intraperitoneális befecskendezése útján immunizáltunk a 0. napon. A kezelés után 8, 18. és 28. napon szérumpróbákat vettünk és passzív hemagglutinációs módszerrel megvizsgáltuk azon anti-BSA-tartalmát. Az alkalmazott adagban a BSA a fogadóállatok számára subimmunogén, azaz semmi vagy csak nagyon csekély antitest-termelést tudott előidézni. Ennél a kísérletnél csak a találmány szerinti eljárással előállított vegyületek vannak abban a helyzetben, hogy 0,1 mg/kg intraperitoneális alkalmazásánál (az immunizálás napján beadva) jelontós mértékben növeljék az antitest-termelést, a BSA-val szemben. Az említett európai szabadalmi leírásban szereplő lipopeptidekkel szemben különösen szembetűnő az új vegyületek jó hatása s.c. alkalmazásnál, ezek ugyaniB már 5 mg/kg-nál hatásosak. A találmány szerinti eljárással előállítható új lipopeptidek kevésbé toxikusak: naponta 5-szőri interperitoneális alkalmazás esetén 10 mg/kg/ /nap dózisokban 5 egymást kővető nap utáni napon e vegyűleteket az egerek szimptómamentesen viselték el és szubkután beadásnál e vegyületek egészen 300 mg/kg dózisig nem toxikusak. Mivel az immunstimuláláshoz szükséges adagok nagyon csekélyek, ezeknél az új vegyületeknek a' terápiás tartománya nagyon széleB. A találmány szerinti eljárással előállítható új lipopeptidek oltóanyagokkal elegyítve segédanyagokként arra használhatók, hogy növeljék az oltás sikerességét, valamint javítsák a hormonális antitestek és/vagy a sejtimmunitás által közvetített fertőzés elleni védelmet a baktériumok, vírusok vagy a parazita kórokozók ellen. Az új lipopeptidek arra használhatók, hogy elősegítsék az iminunreakciókat embernél és állatnál egyaránt. Eszerint e vegyületek különösen alkalmasak arra, hogy stimuálják a test védekezését, például rák esetén, krónikus és akut fertőzéseknél vagy szelek'.ív (antigénfajlagos) immunológiai hiányoknál, valamint veleszületett, úgyszintén szerzett íltalános (azaz nem antigénfajlagos) immunológiai hiányoknál, amelyek öregkorban, valamint súlyos elsődleges megbetegedéseknél és mindenek előtt ionizáló sugárzással történő kezelés vagy iminungátló gyógyszerekkel való terápia után jelentkeznek. Ezek az új vegyületek antibiotikummokkal, kemoterápiás szerekkel vagy más anyagokkal együtt beadhatók avégett, hogy az immunológiai károsodásokat gátolják. Végül az (I) általános képletű hatóanyagok fertőző betegségek általános megelőzésére is alkalmasak embernél és állatnál egyaránt. Az (1) általános képletű vegyületek és származékaik Ra'CO-, Rb'CO- és R2C0- acilgyökeiben az Rs1, Rb1 és R2 telített, alifás 7-17 szénatomos szénhidrogén-csoportok, azaz az acilcsoportok olyan telitett, alifás karbonsavakból származtathatók le, amelyek 8- -18, előnyösen 8-16 szénatomot tartalmaznak az alifás részben. Ilyen karbonsavak például a telített 8-18 szénatomos, különösen egyenes, azaz elágazatlan szénhidrogénláncú zsírsavak, így kapronsav, kaprilsav, pelargonsav, kaprinsav, undecilsav, laurinsav, mírisztinsav, palmítinsav, margarinsav, Bztearínsav. Az (I) általános képletben az Ra1, Rb‘ és R2 csoportok azonosak vagy eltérőek lehetnek. Különösen azok az (I) általános képletű vegyületek és származékaik előnyösek, amelyekben Ra1 és Rb1 az R2 csoporttól eltérő, elsősorban olyanok, amelyekben Ra*C0- és Rb'CO-, valamint R2C0- egymástól függetlenül kapriloil-, kaprinoil-, lauroil-, mirisztoil-, palmitoil- vagy sztearolil-csoportot jelent. A találmány szerinti eljárással előállítható vegyületek egy további előnyős csoportját alkotják a terminális és/vagy oldallánc-karboxilcsoportokat tartalmazó lipopeptidek észterei. Ilyen észterek általában 1-4 szénatomos (rövidszénláncú) alifás alkonolokhól, így metil—, etil-, n-propil- és izopropilalkoholból vagy az egyes butilalkoholokból származtathatók le. A peptidlánc összes kar boxilcsoportja vagy csak néhány lehet jelen észterezelt formában. Előnyös olyan vegyűleteket állítunk elő, amelyekben az illető aminosav oc-karboxicsoportja mindenkor észterezett. A találmány szerinti eljárással előállítható új lipopeptidekre az jellemző, hogy képletükben az As1 aminosav után a D-glutaminsav (D-Glu) vagy a -j-karboxi-D-glutaminsav (D-Gla), vagy ezek amidjai, így a monamid-5 10 15 20 25 30 35 40 45 5C 55 6} 65 4
