192775. lajstromszámú szabadalom • Eljárás aminociklitolok, aminociklitol-aminoglikozid antibiotikumok és származékaik elválasztására
4 192775 5 Célul tűztük ki egy olyan elválasztási módszer kidolgozását, mely nagy oszlop terhelés mellett is jó elválasztást biztosit. Kísérleteinkben meglepő módon azt találtuk, hogy az elválasztás hatásfoka nagymértékben javítható és a kihozatal növelhető, ha gyengén savas kationcserélő gyanta alkalmazása esetén a kromatografálást olyan vizes ammónium-hidroxid oldattal végezzük, mely 2-15% rövid szénláncú alkoholt és/vagy ketont, előnyösen metanolt és/vagy etanolt és/vagy acetont tartalmaz. Találmányunk tárgya tehát aminociklitolok, aminociklitol-aminoglikozid antibiotikumok és félszintetikus származékaik ioncserés kromatográfiás elválasztása oly módon, hogy az elválasztani kívánt vegyületeket ammónium formában lévő gyengén savas kationcserélő gyantán kötjük meg, majd az anyagokat 2- -15% rövid szénláncú alkoholokat és/vagy ketonokat, előnyösen metanolt és/vagy etanolt és/vagy acetont tartalmazó 0,05-0,5 n ammóniumhidroxid oldatokkal kromatografáljuk. A találmány szerinti eljárás lehetővé teszi, hogy aminociklitolok, aminociklitol-aminoglikozid antibiotikumok és félszintetikus származékaik gyengén savas kationcserélő gyantán való kromatográfiás szétválasztásakor az elválasztás hatásfokát javítsuk és egyidejűleg az oszlop kapacitásét növeljük. A találmány szerinti eljárás további előnye, hogy nyers gentamicin szulfát kromatografálásakor a gentamicin C komplex komponensei egymástól is jobban szétválaszthatok, mint a tiszta vizes ammónium-hidroxid oldatokkal végzett kromatografálás során, így a gentamicin C komplex komponensei kedvezőtlen (nem a gyógyszerkönyvek által előirt) arányban tartalmazó nyers gentamicin szulfátból jobb kihozatallal állítható elő a gyógyszerkönyvi előírásoknak megfelelő komponens-összetételű gentamicin C szulfát. A találmány szerinti eljárás lehetővé teszi tág határok között megkívánt komponens összetételű gentamicin C szulfát előállítását. Az alábbi példákban bemutatjuk az aminociklitolok, aminoglikozid antibiotikumok és félszintetikus származékaik ioncserés kromatográfiás elválasztását a találmány szerinti eljárással, anélkül, hogy ezzel a találmány oltalmi körét korlátozni kívánnánk. 1. példa 93 g nyers gentamicin szulfátot, amelyet a 174 695 lajstromszámú magyar szabadalmi leírás alapján állítottunk elő és amely gentamicin C bázis tartalma 540 E/mg, továbbá 3% garamin szulfátot, 5% gentamicin B-Bi szulfátot, 1% gentamicin X szulfátot, 2% gentamicin A szulfátot és 6% sziszomicin szulfátot is tartalmaz - 200 ml ionmentes vízben feloldunk. Az oldat pll-ját 5 n ammónium-hidroxid oldattal 7,0 értékre állítjuk és az oldatot 25 g aktív szénnel derítjük. A derítöszén kiszűrése után az oldat gentamicin tartalmát 750 ml ammóniumciklusban lévő Amberlite CG-50 Type I. gyantán kötjük meg. A gyantaoszlop átmérője 3,6 cm, magassága 74,5 cm. A megkötés lineáris sebesége 0,2 m/ó, amely 3,4 ml/perc térfogati sebességének felel meg. A gentamicin antibiotikumok megkötése után 0,2 m/ó lineáris sebességgel ionmentes vízzel mosatjuk az oszlopot 12 órán keresztül. Ezután 2% metanolt tartalmazó 0,1 n ammónium-hidroxid oldattal megkezdjük a kromatogram kifejlesztését. Az eluens átfolyási sebessége is 0,2 m/ó. 500 ml-es frakciókat szedünk. Az eluálást papír- és vékonyrétegkromatográfiával (J. Antibiotics 28, 35, 1975) valamint nagynyomású folyadék kromatográfiával. (HPLC-vel) ellenőrizzük. A gentamicin Cz-2b megjelenése után az eluens ammónium-hidroxid koncentrációját 0,3 n-ra emeljük, a metanol tartalmat pedig 5%-ra növeljük. A kívánt anyagokat a következő frakciók tartalmazzák: frakciók száma 23-27 gentamicin X 29-35 gentamicin A 37-46 gentamicin B 47-55 gentamicin Bi (némi gentamicin B-vel szennyezve) 59-70 garamin 73-93 sziszomicin 97-180 gentamicin C komplex A megfelelő frakciókat egyesitjük, bepároljuk, a bepárolt koncentrátumokhoz a 168 778 l.sz. magyar szabadalmi leírás 1. példájának 9. lépésében leirt módon kénsavat adunk és az így képzett szulfátsókat metanollal kicsapjuk. A kapott szulfátsók mennyisége következő: 1.6 g gentamicin B szulfát 1.7 g gentamicin Bi szulfát 0.5 g gentamicin X szulfát 1.2 g gentamicin A szulfát 2.1 g garamin szulfát 4.1 g sziszomicin szulfát 65.9 g gentamicin C szulfát (komponensaránya: gentamicin Cl 28.6% . gentamicin Cz-2b 49.2%*' gentamicin Cia 22.2%)’ 2. példa Az 1. példában leirt eljárás szerint kapott 97-180. frakcióban az egyes gentamicin C komponensek megoszlása a következő: 97-118 gentamicin Cz-2b 119-139 gentamicin Cz-zb és gentamicin Ci 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
