192741. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új neplanocin antibiotikumok előállítására
13 192741 14 A következőkben a találmány a mellékelt rajzokra hivatkozva részletesebben Írjuk le. A rajzok a következők: 1. ábra: a neplanocin A ultraibolya abszorpcióspektruma. 2. ábra: a neplanocin A infravörös abszorpciós spektruma. 3. ábra: a neplanocin A magmágneses rezonanciaspektruma. 4. ábra: a neplanocin A-nak az L-1210 leukémiás egerekre gyakorolt hatása. 5. ábra: a neplanocin C ultraibolya abszorpcióspektruma. 6. ábra: a neplanocin C infravörös abszorpcióspektruma. 7. ábra: a naplanocin C magmágneses rezonanciaspektruma. 8. ábra: a neplanocin D ultraibolya abszorpcióspektruma. 9. ábra: a neplanocin D infravörös abszorpcióspektruma. 10. ábra: a neplanocin D magmágneses rezonancispektruma. 11. ábra: a neplanocin B ultraibolya abszorpcióspektruma. 12. ábra: a neplanocin B infravörös abszorpcióspektruma. 13. ábra: a neplanocin B magmágneses rezonanciaspektrum. 14. ábra: a neplanocin F ultraibolya abszorpcióspektruma. 15. ábra: a neplanocin F infravörös abszorpcióspektruma. 16. ábra: a neplanocin F magmágneses rezonanciaspektruma. A találmány értelmében a neplanocinokat például úgy állítjuk elő, hogy alkalmas táptalajra beoltjuk az Ampullariella sp. A 11 079 FERM-P 4494 sz. törzset. A mikroorganizmus tenyésztését különbözőképpen, például szintetikus vagy természetes táptalajon, folyadék vagy szilárd táptalajon való tenyésztéssel hajthatjuk végre. Az ipari előállitás céljára előnyös a folyékony táptalajon való tenyésztés. A neplanocin antibiotikumokat termelő mikroorganizmosok tenyésztésére a táptalaj alkotórészeiként asszimilálható szénforrásokat, asszimilálható nitrogénforrásokat, szervetlen sókat és egyebeket használhatunk. Az alkalmazható szénforrások közül például megemlítjük a glükózt, szacharózt, glicerint, oldható keményítőt, melaszt stb. Asszimilálható nitrogénforrásként peptont, kukoricalekvárt, szqjalisztet, húskivonatot, rizskorpát, kazeinhidrolizátumot, nitrátokat, ammónlusót stb. használhatunk. Szervetlen sót, például nátriumkloridot, kálium-, magnézium-, vas(II)- vagy mangánfoszfótot szintén alkalmazhatunk. A táptalajhoz habzást gátló szert, például szilikonolajat vagy szójababolajat is hozzáadhatunk. A folyékony tenyésztéshez a süllyesztett, levegőztetett tenyésztést előnyösen alkalmazhatjuk. Ebben az esetben a mikroorganizmusok számára legkedvezőbb tenyésztési hőmérsékletet kell választani, ez előnyösen 25-30 °C. A tenyésztés időtartama a körülményektől függ, és általában 2-4 nap lehet. A tenyésztés folyamán a közeg pll-ját előnyösen semleges és gyengén savus között kell tartani. Az így kapott fermentlé tartalmazza a neplanocin antibiotikumokat. Ezek elkülönítését a mikroorganizmusok anyagcseretermékeiről használt, szokásos elkülönítési vagy elválasztási módszerekkel hajtjuk végre. Mivel a neplanocinok gyengén bázisos anyagok, ezeket alkalmas adszorbenseken való adszorbeáltatással, majd alkalmas oldószerrel való kioldással lehet elkülöníteni. Az adszorbensek közül például megemelítjük az aktívszenet, a kationcserélő gyantákat és az aktiv alumíniumoxidot vagy kovasavgélt. Az eluáló oldószert a használt adszorbenstől függően kell kiválasztani, például vízzel elegyedő szerves oldószereket, így vizes metanolt, vizes acetont vagy vizes dioxánt, vagy savas, lúgos vagy sótartalmú oldatokat hasznáhatunk. Ezenkívül a neplanocinokat az anyag gyengén bázisos természetét alapján különíthetjük el, és tisztíthatjuk. Az antibiotikumokat például kationcserélő gyantán (ilyen például a Rohm and Haas Co., USA cég által Amberlite vagy a DOW Chem. Co. USA cég által Dowex 50 IRC-50 kereskedelmi néven forgalombahozott kationcserélő gyanta) adszorbeéljuk, és alkalmas savas, lúgos vagy sós oldattal eluálhatjuk. Az antibiotikumok elkülönítésére, eluálásra és tisztításra előnyösen az adszorbens és az ioncserélő gyanta kombinációját alkalmazhatjuk. A tenyészet szüredékét az antibiotikum adszorbeálására például Amberlite IR-120 (kereskedelmi név) kationcserélő gyantára visszük fel, alkalmas alkálikus oldószerrel, például 3,7 n vizes ammónia-oldattal eluálva, a hatékony frakciót kapjuk, és miután ezeket semleges vagy gyengén lúgos kémhatásra állítottak be, az antibiotikumokat aktívszénen adszorbeáljuk, majd 7056-os metanollal eluáljuk. Az eluált oldatot Amberhte IRA-410 (kereskedelmi név) anioncserélő gyantán adszorbeáljuk, és vízzel ismét eluáljuk, hogy a hatékony frakciókat összegyűjtsük. Az egyesített frakciókat bepárolva, nyers terméket kapunk, ezt végül kovasavgélen adszorpciós kromatog ráfiéval tisztítjuk. A további tisztítást átkristályosítással hajtjuk végre. Az egyes anyagok tisztaságát úgy ellenőrizzük, hogy meghatározzuk, egyetlen olvadáspontot, papírkromatográfiávat, vékonyréteg-kromatográfiával és papír-elektroforézissel 263 mp-nál ultraibolya fényben egyetlen foltot mutat-e. A következő példák a találmányt közelebbről szemléltetik, de terjedelmét semmiképpen nem korlátozzák. A hőmérsékleti adatokat Celsius-fokban adjuk meg. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 fi
