192668. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 15 alfa-hidroxi-4-androsztén-3,17-dion mikrobiológiai előállítására
4 192668 5 habzásgátlószer eltávolítása céljából hexánnal mossuk, végül metil-izobutil-ketonból kristályosítjuk. Szűrés és szárítás után 18,4 g 15cc-hidroxi-4-androsztén-3,17-diont kapunk, amelynek olvadáspontja 193-196 °C. 2. példa Az 1. példa körülményei között a Pénicillium melinii (CBS P 30) törzs alkalmazásával 15 g 4-androsztén-3,17-diont 75 órás fermentálással 11,7 g 15oc-hidroxi-4-androsztén-3,17-dionná alakítunk, amelynek olvadáspontja 191-194 °C. 3. példa Az 1. példa körülményei között a Fusarium oxysporum f. vasinfectum ATCC 7808 törzs alkalmazásával 22,5 g 4-androsztén-3,17-diont 24 óráB fermentálással 19,36 g 15oc-hidroxi-4-androsztén-3,17-dionná alakítunk, amelynek olvadáspontja 197 °C. B) Példa a 15cc-hidroxi-4-androsztén-3,17-dion alkalmazására: a) 40 g 15oc-hidroxi-4-androsztén-3,17- -dion 200 ml piridinnel készített oldatát jeges fürdőben lehűtjük, és utána cseppenként hozzáadunk 25,7 ml benzoil-kloridot. A reakcióelegyet jeges fürdőben 30 percig keverjük, majd 3,2 ml vízzel elegyítjük és további 30 percig keverjük. A reakcióelegyet utána keverés közben jeges vizbe öntjük, a kivált csapadékot kiszűrjük, és vízzel mossuk. Ekkor a kivált termék kezd olajszerű lenni, ezért diklór-metánnal oldjuk. A szerves fázist vizzel mossuk, nátrium-szulfáton szárítjuk, és bepároljuk. így 53 g nyers 15oc-benzoiloxi-4-androsztén-3,17-diont kapunk olajként. b) 101,5 g trimetil-szulfoxónium-jodidot 1 liter dimetil-szulfoxidban 17,88 g nátrium-hidroxiddal szobahőmérsékleten 1,5 óra hosszáig erősen keverünk, minek során a nátrium-hidroxid nagyrészt oldatba megy. Argongáz alatt és vizhűtés közben 53 g 15cc-benzoiloxi-4-androsztén-3,17-diont oldunk 200 ml dimetil-szulfoxidban, az oldatot 5 perc alatt hozzáadjuk a reakcióelegyhez, amelyet végül még 1,5 óra hosszat keverünk. A reakcióelegyet utána körülbelül 2 kg nátrium-klorid hozzáadása közben keverés mellett 10-szeres mennyiségű jeges vizbe öntjük. A kivált csapadékot vizzel mossuk, és vákuumban 50 °C-on szárítjuk. így 31 g nyers 15/3,16/5-metilén-4-androsztén-3,17-diont kapunk. Az egész vizes fázist dietil-éterrel extraháljuk, az éteres fázist telitett nátrium-klorid oldattal mossuk, nátrium-szulfáton szárítjuk, éB bepároljuk. így még 6 g nyers 150,16B-metilén-4-androsztén-3,17-diont kapunk. A csapadékot és az éteres extraktumot egyesítjük, és szilikagélen aceton/hexán gradienssel (20 liter, 0-25X aceton) kromatografáljuk. így 22,7 g 15/),16/}-metilén-4-androsztén-3,17-diont eluálunk. A diizopropil-éterból átkristályositott minta 185-186,5 °C-on olvad. c) 22,7 g 15û,16/3-metilén-4-andro6ztén-3,17-dion 397 ml metil-pirrolidonnal készített oldatát jeges fürdőben lehűtjük, argongáz alatt 90,8 g kálium-metilátot adunk hozzá, és 10 percig keverjük. Utána 5 perc alatt hozzácsepegtetünk 34,1 ml propargialkoholt. A reakcióelegyet további 15 percig keverjük, és keverés közben 10-szeres mennyiségű jeges vizbe öntjük. Az elegyet hig kénsavoldattal semlegesítjük, az esetleg felesleget fölös nátrium-hidrogén-karbonáttal távolítjuk el, és nátrium-kloríddal telitjük. A kivált csapadékot kiszűrjük, vizzel mossuk, és vákuumban 60 °C-on szárítjuk. így 30,2 g anyagot kapunk, amelyet etil-acetátból aktivszénnel derítve átkrÍ6tályoBÍtunk. A kapott 18,6 g termék 17/3-hidroxi-17cc-(3-hidroxi-l-propinil)-15ö,16/3-metilén-4-andro8ztén-3-on és 17ß- hidroxi- 17cc- ( 3- hid roxi-1- propinil )-15/3,16fl-metilén-5-androsztén-3-on 224,6 °C olvadáspontü keveréke. 18,6 g ilyen keveréket oldunk 172 ml tetrahidrofuránban és 172 ml metanolban, majd argongáz alatt 8,6 ml 2 n nátrium-hidroxid oldattal elegyítjük, és szobahőmérsékleten 15 percig keverjük. A reakcióelegyet utána keverés közben 10-szeres mennyiségű jeges vizbe öntjük, amely 10 ml 2 n kénsavoldatot tartalmaz. Telitjük nátrium-kloriddal, a kivált csapadékot kiszűrjük, és vizzel mossuk. A vákuumban 60 °C-on végzett szárítás után 18,2 g 17/3-hidroxi-(3-hidroxi- 1-proponil)-15/3,16/3-metilé n-4-an d roszté n-3-ont kapunk. Olvadáspont: 222,5 °C. d) 18,2 g 17/3-hidroxi-17oc-(3-hidroxi-l-propinil)-15/3,16/3-metilén-4-androsztén-3-ont 84 ml tetrahidrofurán és 84 ml metanol elegyében 5,6 g trisz(trifenil-foszfin)-ródium(I)-klorid hozzáadása után szobahőmérsékleten és normál nyomáson hidrogéngázzal telítésig hidrogénezünk. Reakcióidő: 5 óra. Az anyag a hidrogénezés során tökéletesen oldatba megy. A hidrogénezett oldatot utána vákuumban szárazra pároljuk. A kapott 18,0 g nyers 17/3-hidroxi-17«c-(3-hidroxi-propil)-15/3,16/3-metilén-4-androsztén-3-ont közvetlenül felhasználjuk a következő reakcióhoz. e) A 18 g 17ß-hidroxi-17cc-(3-hidroxi-propil)-15/3,16/3-metilén-4-androBztén-3-on nyerstermék 238 ml piridinnel készített oldatát. 47,6 ml króm-trioxid 118 ml vizzel és 119 ml piridinnel készített oldatával elegyítjük, és 70 °C-on 6 óra hosszat keverjük. A reakcióelegyet utána 4 liter etil-acetáttal kevertetjük. Az elegyet dekantáljuk a kivált krómsókról, és az etil-acetátos fázist vizzel mossuk. A szárítás és bepárlás után a piridintartalmú nyersterméket szilikagélen aceton/hexán grádienssel (20 liter, 0-40% aceton) kromatografáljuk. így 11,3 g anyagot 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
