192617. lajstromszámú szabadalom • Eljárás különleges tisztaságú hialuronsav előállítására
192 617 2 Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás nagynyomású folyadékkromatográfiás vizsgálattal szimmetrikus molekulatömeg eloszlási csúcsot adó, legfeljebb 45 mg/ml nukleinsavtartalmú és legfeljebb 1,25 mg/ml fehérjetartalmú hialuronsav előállítására hialuronsavat termelő hialuronidáz negatív vagy hialuronidáz gátolt mikroorganizmusok tenyésztésével, azzal jellemezve, hogy — a mikroorganizmust sejten kívüli fehérjétől mentes tápközegben tenyésztjük; — a sejtek falából a sejt által termelt, sejtbe zárt hialuronsavat a tenyészethez adott anionos felületaktív anyaggal kiszabadítjuk, — a jelenlévő hialuronsavat kationos felületaktív szerrel kicsapjuk, majd — a kicsapott komplexből hialuronsavat ismert eljárásokkal tisztítjuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás a sejt által termelt, sejtbe zárt hialuronsavnak a sejtfalból való kiszabadítására a sejt roncsolása nélkül, azzal jellemezve, hogy az ép sejteket vizes közegben anionos felületaktív anyaggal elegyítjük. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás tisztítási lépése, hialuronsavnak anionos és kationos felületaktív anyaggal adott komplexéből való kiextrahálására, azzal jellemezve, hogy a hialuronsavat tartalmazó komplexet nagy molaritású vizes kalciumion oldatban oldjuk. 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás tisztítási lépése, azzal jellemezve, hogy a hialuronsav fehérje- és nukleinsavtartalmát a vizes hialuronsavoldatnak hitrocellulóz szűrőn való átengedésével csökkentjük. 5. Az 1. igénypont szerinti eljárás tisztítási lépése, azzal jellemezve, hogy a hialuronsav pirogenitását a 5 vizes hialuronsavoldatnak erős savval mosott aktív szénen való átengedésével küszöböljük ki. 6. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a hemolitikus Streptococcusok A vagy C csopontjába tartozó organizmust tenyésztünk. 10 7. A 6. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy Steptococcus equit tenyésztünk. 8. Az 1. igénypont szerinti eljárás tisztítási lépése, azzal jellemezve, hogy a hialuronsav kiextrahálását követően ismételt alkoholos kicsapást és vizes oldást 15 végzünk, majd ezt a tisztítási lépést követően nitrocelhilózon szűrjük át az anyagot és a tisztítást kívánt esetben megismételjük. 9. Eljárás steril gyógyászati készítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy az 1 —8. igénypontok bár-20 melyike szerint előállított, lényegében fehérje- és nukleinsavmentes és nagynyomású folyadékkromatográfiás vizsgálat bizonyossága szerint egyetlen, közel szabályozott molekulatömeg tartományba eső frakciót tartalmazó, 1,25 mg/ml alatti fehérjetartalmú és 45 25 Atg/ml alatti nukleinsavtartalmú hialuronsavat vagy sóját gyógyászati célra alkalmas hordozó- és/vagy segédanyaggal összekeverve gyógyászati készítménnyé alakítjuk. 10. A 9. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, 30 hogy 0,10 mg/ml alatti fehérjetartalmú és 5 jug/ml alatti nukleinsavtartalmú hialuronsavat alkalmazzunk. 10 ábra 9
