192617. lajstromszámú szabadalom • Eljárás különleges tisztaságú hialuronsav előállítására

1

192 617

2

V. Táblázat

Különböző készítmények hialuronsav egységeinek relatív molekulatömege

5

Minta

Relatív molekulatömeg (millió) Tartomány Átlag

1. Fermentáció

2,2 -3,9

2,8

10

2. Fermentáció

2,5 - 4,0

3,8

3. Fermentáció

1,7 -2,8

2,4

15

4. Fermentáció

1,1 -3,9

2,6

Hyaluron

0,015-3,0

0,015

HYALOVET

<0,010 - 3,7

0,015, 1,8, 3,7

20

HYARTILr

<0,010 - 3,8

1,9

A különböző,

az előzőekben

ismertetett analiti-25

kai vizsgálatok alapján megállapítottuk, hogy a baktériumokból egyszerű eljárással extrahált HA tisztább, mint a három, kakastaréjból, illetve köldökszinórból előállított készítmény bármelyike. Utóbbiak összetett eljárással készülnek, és az eljárás ho- 30 zama nem kielégítő, mindössze, 0,079% HA. Ezzel szemben a Streptococcusokból extrahált HA hozam

50 súly%.

Izületi nedv helyettesítése 35

Az előzőek szerint baktériumból előállított HA reaktivitását lovak sípcsont-lábtői és csuklócsont-orsócsonti ízületein vizsgáltuk. A HA készítmények lovak ízületébe való injektálását követően a készítmények reaktivitásának mérésére a következő klinikai 40 indexek vizsgálatát végeztük.

A vizsgálat menete a következő:

1. Injektálás előtt megállapítjuk az ízületek mozgásképességét. A mozgás gátoltságát az alábbiak 45 szerint értelmezendő 0—5 jelű indexekkel adjuk meg:

Mozgásgátoltsági index

0 = a mozgás nem gátolt

1 = enyhe mozgásgátoltság — mérsékelt 50

2 = észlelhető mozgásgátoltság — mérsékelt

3 = nyilvánvaló mozgásgátoltság

4 = komoly mozgásgátoltság, az állat vonakodik

mozgástól, teher hordásától,

5 = nem képes teherhordásra, fekvő helyzetéből 55

nem képes felemelkedni.

2. A lovat nyugtatóval, például RumpunK nyugtatóval kezeljük.

3. Az injektálandó ízület körüli területet leborotváljuk. 60

4. Meghatározzuk a duzzadtság megfigyelésen alapuló indexét, az indexek értelmezése a következő:

Duzzadási index

0 = Nincs duzzadás

1 = Nincs nyilvánvaló duzzadás — tapintható nedv 65

2 = Enyhén észlelhető duzzadás — tapintható

nedv

3 = A teljes ízület észlelhető duzzadása

4 = Az injektálás helyén komoly duzzadás

5 = Komoly duzzadás az ízületet meghaladó felületen.

5. Textilszalag mércével megmérjük az ízűiét kerületét közvetlenül a harmadik lábközép ízület (sípcsont—lábtői ízület) elülső része előtt vagy közvetlenül a járulékos kéztőcsont kidudorodásától azaz a kéztőcsont-orsócsont körül (kéztőízület).

Feljegyezzük az ízületet mm-ben megadott pontos méretét az injekció beadása előtt és után. Az injektálást követően naponta kiszámítjuk az ízület kerülete és az ízületnek az injekció beadását megelőző kerülete közötti különbséget. Ha az eltérés az 1 cm-t maghaladja a pontos mért értéket a klinikai index meghatározása céljából hozzáadjuk a másik két index értékéhez.

I 6. 1-2 cm3 izületi nedvet 3 cm3-es injekciósfecskendővel eltávolítunk az ízületből.

7. Az ízületbe injektálunk 2 cm3, 1%-oshialuronsav készítményt, amelynek a reaktivitását vizsgálni kívánjuk. Az injektálást úgy végezzük, hogy az ízület traumáját a lehető legjobban elkerüljük.

8. Az injektálást követően annak helyét 1—3 percig űjjjal nyomjuk. Ennek célja az igen viszkózus HA vissz afolyásának megakadályozása.

9. Az injektálást követően 4 egymást követő napon, majd a 7. napon megfigyeléseket és méréseket végzünk.

10. Kiszámítjuk a klinikai indexet (Cl) a következő módon:

Teljes mozgásgátoltsági index (TLI) = Napi mozgásgátoltsági index összege;

Teljes duzzadási index (TLI) = Napi duzzadási megfigyelések 4- ízületkerület mérési eredményeinek összege (1 cm-t meghaladó különbség). Cl = TLI + TSI

11 Az eredményeket értékeljük.

önmagában az injekció beadása az ízületbe annak némi duzzadásával és mozgásgátoltsággal járó traumáját okozza. Ez számos, ízületbe adott, foszfáttal pufferolt sóoldat (PBS) injektáció beadásának és néhány esetben csak az ízületi nedv eltávolításának hatását értékelve állapítottuk meg. A klinikai indexet ilyen traumatizált ízületeken állapítottuk meg. A klinikai indexek 56 ízületet vizsgálva 0-18,7 értékek között változtak. Ha azonban a traumatizált ízületek ilyen nagy egyedi eltéréseket adó klinikai indexeit a három külön vizsgálatsorozat átlagaként adjuk meg, az átlagolt klinikai indexek 0,7, 5,3 és 3,4 értékűek. Ennek alapján feltételezzük, hogy legalább 10 ízületre adott eredmény átlagát véve az injekciós trauma következtében 6,0 vagy az alatti értékű átlagos klinikai indexet kapunk. Erre alapozba a 10 ízületre kapott 6,0 vagy alacsonyabb átlagos klinikai indexet elfogadhatónak tekintjük HA készítmények lóízületeken való reaktivitásának vizsgálatánál. Azok a termékek azonban, amelyek 10 ízület átlagaként 6,0-nál nagyobb klinikai indexet adnak, nem minősülnek elfogadhatónak. Ezen kritériumok alkalmazásával megvizsgáltuk néhány HA készítményt. Eredményeinket a VI. táblázatban ismertetjük.

7