192617. lajstromszámú szabadalom • Eljárás különleges tisztaságú hialuronsav előállítására

1

I

192 617

II. Táblázat

2

1%-os HA-oldat fehérje és nukleinsav szennyezettsége U. V. spektrofotometriás vizsgálat alapján

Minta

U. V. abszorpció

Koncentráció

0. D O.D.

Fehérje

Nukleinsav

280 m ji-nál 257 m p-nál

mg/ml

Mg/ml

1. Fermentáció

0,45 0,00

0,66

0,0

2. Fermentáció

0,83 0,00

1,22

0,0

3. Fermentáció

0,75 0,00

1,10

0,0

4. Fermentáció

0,47 0,00

0,69

0,0

Miles Labs.

(kakastaréj, kis tisztaságú)

1,16 1,31

1,70

48,5

Pharmacia

HYARTILr

0,91 1,63

1,33

60,3

Trans Bussan Hyalovet

1,27 2,0

1,86

74 300

1 /30 hig. = 0,27

III. Táblázat

Hialuronsav-oldatok tisztaságának vizsgálata U. V. abszorpciójuk alapján

[

Tisztítási lépés

U. V.

abszorpció

0. D.

0. D.

0. D.

280 mjr-nál

2.57 m/i-nál

195 mM-nál

Etanol Izopropanol

Etanol

Izopropanol

Etanol Izopropanol

Első vizes oldás

0,480 0,442

0,456

0,341

0,740 0,643

Második vizes oldás

0,215 0,288

0,204

0,230

1,00 0,898

Harmadik vizes oldás

0,215 0,155

0,191

0,182

1,76 1,82

Negyedik vizes oldás

0,078 0,070

0,140

0,120

1,90 1,82

(Végső koncentráció:

1%-os vizes oldat)

és a HYALOVETTM (Trans Bussan) tisztaságával, melyet vizsgálataink szerint 99,78, illetve 99,86%-os nak találtunk.

A bakteriális eredetű HA tisztaságára vonatkozóan további vizsgálatokat végeztünk. A két alkoholos tisztítási művelet hatékonyságát a spektrofotometriásán 280, 257 és 195 m /u-nál mért abszorpcióját jelenti a lineárisan aránvos a HA koncentrációval A

Eli. táblázatban az optikai sűrűség (O. D.) értékeket mutatjuk be, a IV. táblázatban ezeket az O. D.

60 értékeket fehér-, nukleinsav-, illetve HA-koncentráció értékekre átszámítva adjuk meg. A két utolsó fermentációs eljárásban nyert bakteriális eredetű HA mind 95%-os etanollal, mind 99%-os izopropanollal végzett extrahálás esetén 99,99%-os tisztaságú.

65

5