192545. lajstromszámú szabadalom • Eljárás ß-oxo-Ó.karbamoil-pirrol-propionitril-származékok, valamint ezeket a vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 192 945 2 Az A-21207 számú Európa szabadalmi bejelentés gyulladásgátló és artritisz elleni ß-oxo-a-fenilkarbamoil-pirrolpropionitril-származékokat ismertet, amelyek a pirrolgyííríi l-helyzetében alkilcsoporttal vagy fenil-alkil-csoporltal helyettesítettek. Azt találtuk, hogy a találmány szerinti eljárással előállított új pirrolpropionitrilszármazékok a terápiában előnyösebbek, mint az ismert, l-helyzetben szubsztituált pirrolpropionilril-származékok. A találmány tárgya eljárás új, (I) általános képletű a-(adott esetben helyettesített -fenil-karbamoil)pirrolpropionitril-származékok vagy tautomerjeik előállítására, amely képletben Py jelentése 2. pirrolilcsoport, és Ph jelentése fenilcsoport, mely szubsztituálatlan vagy 1-2 azonos vagy különböző szubsztituenssel helyettesített - amely lehet halogénatom vagy trifluor-mclil-esoporl, továbbá az (I) általános képletű vegyületek sóinak, lóként gyógyászatilag elfogadható sóinak, valamint a találmány szerint előállított vegyületeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására. Különösen előnyösek az I általános képletnek megfelelő olyan (II) általános képletű vegyületek, tautomerjeik, sóik, főként gyógyászatilag elfogadható sóik, mely képletben R,és R4 jelentése hidrogénatom, halogénatom vagy trifluor-metíl-csoport. Előnyösek továbbá az olyan (II) általános képletű vegyületek és sóik, főként gyógyászatilag elfogadható sóik, mely képletben R3 és R4 hidrogénatom, fluoratom, klóratom vagy trilluor-mctil-csoport, továbbá az ilyen vegyületek sói, főként gyógyászatilag elfogadható sói, előnyösen nátrium-, kálium-, kalcium-, trietilammónium- vagy trisz(hidroxi-etil)-ammóniumsói. Főként az olyan (II) általános képletű vegyületek előnyösek, melyekben az R3 és R4 csoportok legalább egyike hidrogénatomtól eltérő jelentésű, és a fenilgyürü para-helyzetét foglalja el, előnyösek továbbá az ilyen (II) általános képletű vegyületek sói, főként gyógyászatilag elfogadható sói, előnyösen nátrium-, kálium-, kalcium-, trietilammónium- vagy trisz(hidroxietil)-ammóniumsói. Az előzőekben alkalmazott általános meghatározások a találmány keretében a következő jclcntésück: „Rövidszénláncú” kifejezéssel az előzőekben és az azután következőkben olyan szerves csoportokat és vegyületeket jellemzőnk, legfeljebb 4, főként 1 vagy 2 szénatomot tartalmaznak. A halogénatom jelentése előnyösen klór- vagy fluoratom, de lehet bróm- vagy jódatom is. Az (I) általános képletű vegyületek tautomer alakjai a megfelelő enolszerkezettel rendelkeznek, és az (la) általános képlettel írhatók le, ahol Py, és Ph az előzőekben az (I) általános képletnél megadott jelentésűek, és egyensúlyban vannak az (I) általános képletű vegyületekkel. A tautomer alakjukban egyensúlyban lévő (I) általános képletű vegyületek savjcllcgüek. Ezek az (la) általános képletű, enolos tautomer szerkezet származékaiként sókat alkotnak. A gyógyászatilag elfogadható sók, melyeket ezek a vegyületek bázisokkal alkotnak, például egy alkálifém-, alkáliföldfém-hidroxidból-, réz- vagy cink hidroxidból, ammóniából, amono-, di- vagy tri(rövidszétjláncú alkil- vagy hidroxi-rövidszén!áncú a!kil)-aminokból, monociklusos amidokból vagy alkilén-diaminokból vezethetők le. Ilyen sók, például a nátrium-, kálium-, magnézium-, ammonium-, mono-, di- vagy tri-(metil-, etil- vagy hidroxietil)-ammónium-, pirrolidinium-, etilén-diammónium- vagy a morfoliniumsók vagy ezek különböző hidrátjai. A találmány szerinti vegyületek értékes gyógyászati tulajdonságokkal rendelkeznek, így elsősorban gyulladásgátló, analgetikus (antinociceptin), reumaellenes, immunpotencirozó és artritisz-ellenes hatásúak. Ezen hatásokat in vitro vagy in vivo kísérletekben mutathatjuk ki. Ez utóbbiakban előnyösen emlősöket, például patkányokat, tcngcrimalacokat vágj' kutyákat használunk kísérleti alanyként. A találmány szerinti vegyületeket enterálisan, előnyösen orálisan, parenterálisan, például szubkután vagy intravénásán, vagy topiktisan, például vizes oldatként vagy olajban oldva, vagy keményítőt tartalmazó szuszpenzió Tormájában adagolhatjuk. Az alkalmazott dózis körülbelül 0,1 és 100 mg, előnyösen !-50mg/kg/nap közölt van. A fenti hatások kimutatására szolgáló vizsgálatok részben klasszikus eljárások, például a karragenin-mancs ödéma vagy adjuváns artritisz kísérlet, patkányokon, a synovitis-kísérlet kutyákon vagy az a vizsgálat, melynek során az UV-fény által létrehozott eritémát értékeljük. Alkalmazhatók modern vizsgálati módszerek is, mint például a semleges proteázgátlás [Arthritis, Rhem., 17,47 (1974)] vagy a leukocita kemotaxis gátlása [Ann. N.Y. Acad. Sei., 256, 177 (1975) ]. További vizsgálati módszer például a neutrofil adherencia csökkenése [Amer, J. Med., 61, 597 (1976) ], a prosztaglandin szintetáz gátlása [Biochem., 10, 2372 (1971)] vagy a fenil-kinon vonaglási teszt. Az immunpotencirozó hatást BCG-immunizált állatokon in vitro vagy in vivo mutatjuk ki. A sejtek által továbbított immunitás fokozását in vitro a monociták megnövekedett kemotaxisának mérésével a következőképpen határozzuk meg: 250-300 g súlyú hím Charles River-patkányokat 0,1 ml Bacillus Calmette Gucrin-vakcinával (BCG) immunizálunk. Egy hét elteltével a kísérleti állatoknak a makrofágok feldúsúlásának csökkentésére intraperitoneálisan 10 ml steril 2 %-os rizskeményítő-oldat injekciót adunk. Az immunizálást követő 11. napon az állatokat leöljük, és a peritoneális makrofágokat 20 ml, 25 egység/ml heparint tartalmazó Gey-pufTeroit só-oldattal összegyűjtjük. Ezután a sejteket 10 percen át 1000/perc fordulattal centrifugáljuk, további 50 ml Gey-oídattal, ugyanilyen fordulatszámmal és ideig mossuk, majd 0,1 % humán szérum-albumint tartalmazó Gey-oldattal 2x 106 sejt/ml koncentrációra hígítva szuszpendáljnk. A vizsgálati anyagokból 1 x 102 molos dimetilacetanidos oldatokat készítünk. A további hígításokat Gey-oldattal készítjük, majd végül a fenti sejtszuszpenzióhoz adjuk oly módon, hogy 10' , 10' , 10 és 10 végkonccntrációt érjünk el. A szuszpenziókat a módosított Boydcn-Chemotaxis-kamra felső részébe visszük, és a vizsgált anyagok a sejtekkel együttmaradnak. Kemotaxist előidéző szerként patkány szérumot alkalmazunk, melyet Escherichia coliból származó lipopoliszacchariddal (Difco) aktiválunk (I : 10 hígítás, pH = 7,1). Ezt a szérumot töltjük a kemotaxis-kamra alsó részébe. A kamra sejteket tartalmazó részét a kemotaxiás oldattól cellulóz szíirőmembrán választja cl, mely 8 mikron pórusmérctű. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
