192388. lajstromszámú szabadalom • Eljárás nurzeotricin előállításáraa, valamint só alakjában vagy adszorbeált állapotban történő kinyerésére
1 2 192.388 Elemanalizis számított, %: C 36,85 H 6,32 N 16,89 S 5,87 talált, %: C 36,98 H 6,32 N 17,16 S 5,85 Az elemi analízis értékel megközelítően astreptotrj dn-D-szulfát és a streptotricin-F-szulfát 2:1 arányú keveréke összetételének felel meg. 10. példa A 8. példa szerint kapott szűrt tenyészlé (48,46 JUg/ml nurzeotrlcin) 75 literjét lentről felfelé 4 l/ó sebességgel 2 liter Na-formájú Wofatlt CP ioncserélő gyantát tartalmazó oszlopon át vezetjük. Utána az oszlopot 15 liter desztillált vízzel, 9 liter 0,1 n ecetsavval, majd újból 10 liter desztillált vízzel mossuk, ezt követően az antibiotikumot 14 liter 0,5 n foszfor savval eluáljuk. A 3—4 pH-jú eluátumot 2 liter OH -formájú Wofatit AD 41 ioncserélő gyantával elkever ve semlegesítjük. A kivált kalcium-foszfátot az ioncse rélő gyantával együtt kiszűrjük, a szűrletet ammó nium-hidroxid-oldattai pH 7,7-re lúgosítjuk, amikoris ammónium-magnézium-foszfát válik ki, amelyet szin tén kiszűrünk. Utána az egyértékű kationok eltávolí tása céljából a nurzeotricin-foszfát oldatot 1 liter H -formájú Wofatit KP 16 ioncserélő gyantával elkever jük. Utána a 17 liter oldatot vákuumban 40 °C-on 1,5 liter térfogatra bepároljuk, foszforsawal pH 4,5 re savanyítjuk és aktívszénnel derítjük. A tiszta szűr letet 20 liter metanolba csepegtetjük. A termék kol loidálisan oldatban maradó részét 25%-os dimetil-jamin-oldat ■ hozzáadásával jól szűrhető plyhekké alakítjuk, a csapadékot szűrjük, metanollal mossuk,' majd vákuumban kalcium-klorid felett szárítjuk. Hozam: 169,5 g nureotricin-foszfát [ap q: -29,9° (c = 1, víz), szulfáthamu: 1,06% mikrobiológiai hatékonyság: 818 /tg/mg 11. példa A 8. példa szerint tisztított tenyészlé (3000 jrg/ml nurzeotricin) 75 literjét 4 l/ó sebességgel lentről felfelé 2 liter Na-formájú Wofatit CP ioncserélőgyantával töltött oszlopra vezetjük. Adszorbeálás után az oszlopot 15 liter desztillált vízzel, 10 liter 0,1 n ecetsavval majd újból 10 liter desztillált vízzel mossuk, és az antibiotikumot 10 liter 0,5 n oxálsav-oldattal eluáljuk. All liter eluátumot 2 liter OH-formájú Wofatit AD 41 ioncserélő gyantával elkeverve semlegesítjük. A kivált sókat az ioncserélő gyantával együtt kiszűrjük, és a tiszta szűrletet az egyértékű kationok eltávolítása céljából 2 liter H-formájú Wofatit KP 16 ioncserélő gyantával összekeverjük. Az oldatot 0,5 liter OH-formájú Wofatit AD 41 ioncserélő gyantával semlegesítjük, majd vákuumban 40 °C-on 800 ml térfogatra bepároljuk. A koncentrátumot 7 g aktívszénnel derítjük, szűrjük és 12 liter metanolba csepegtetjük. A termék kolloidálisan oldatban maradó részét 25%-os dimetilamin-oldattal pelyhesítjük. A kiszűrt csapadékot metanollal mossuk és vákuumban kalcium-klorid felett szárítjuk. Hozam: 162 g nurzeotricin-oxalát [al25p: 41,8° (c * 1, víz), szulfáthamu: 0,9% mikrobiológiai hatékonyság: 809 fJg/mg Hatástani példák Sertéshizlalási kísérletekben szárazanyagra számítva 40 mg/kg nurzeotricinnel kiegészített keverék takarmány (premix) etetésével a 70 napos kísérleti szakaszban az élősúly átlagos gyarapodásának 6%-os javulását figyelhetjük meg. Egy másik kísérletben a takarmány szárazanyagra vonatkoztatva 21 mg/kg nur-5 10 15 20 25 3Q 35 40 45 50 55 60 zeonidnt adagoltunk micélium-adszorbeátum alakiában a takarmánnyal együtt. A 70 napos hizlalás! kísérlet során az átlagos napi súlynövekedés 23%-kal volt magasabb, mint a kontrolié, ugyanakkor a kezelt állatok mintegy 7%-kal kevesebb takarmányt fogyasztottak. A nurzeotricánt micéliumos adszorbeátum alakjában különböző dózisokban (a maximális dózis 52,5 mg/állat és nap) alkalmaztuk borjak nevelésében. Az antibiotikum az állatok egészségi állapotát kedvezően befolyásolta, ez látható az elpusztult állatok számának a csökkenéséből, valamint a hasmenéses napok drasztikus visszaszorításából. Az élősúly gyarapodásra kifejtett kedvező hatás borjak esetén főleg 4 hetes korig volt megfigyelhető. A takarmányhoz 35 mg/állat dózisban adagolt nurzeotricin 4 hetes hizlalás alatt az élősúly fejlődésének 25%-os javulását eredményezte, a 10 hetes hizlalás! kísérlet befejezésekor ez a paraméter 13% volt. \ nurzeotridn-micélium állatkísérletek tanúsága szerint nem toxikus. Mindkét nembeli 200 g testsúlyú Wistar patkányokon egyszeri adagként szondával bea dott 5000 mg/kg testsúly dózisú nurzeotricín-micélium a testsúlygyarapodást nem befolyásolta, pusztulíst nem okozott. 12. példa Nurzeotricin-tartalmú premixként micéliumos bentonit-adszorbeátumot készítünk. A fermentálás megszakítása után azonnal 100 liter fermentlére számítva 0,1 liter formalint adunk és 15-30 perces keveréssel homogenizáljuk. Ezt követően a pH-értéket 25%-os kénsav-oldat adagolásával r',0-ta állítjuk. Már mielőtt a tenyészlét tartósítottuk volna, megfelelő időzítéssel saválló keverőben bentonit-szuszpenziót készítünk 2 kg naftrifikált (azaz íinomkristályos nátrium-karbonáttal aktivált) bentonit, 15 liter víz és 0,2 liter 25%-os kénsav-oldat összekeverésével. A jzuszpenziót legalább 12 órán át duzzadni hagyjuk. Az előkészíteti bentonit-szuszpenziót 100 ml tény észlével (5000 mg nurzeotricin/ml) összekeverjük, aminek során általában 6,0—6,5 pH érték áll be. Szükség esetén a pH-értéket 25%-os kénsav-oldattal, illetve 30%-os nátrium-hidroxid-oldattal az állított tartományra állítjuk. Az adszorbeálódás alatt a szuszpenziót állandóan keverjük. Legalább 60 perces érintke/.tetés után a szilárd anyagot szűréssel vagy szeparálással elválasztjuk. Az elválasztást különösen előnyösen vákuumos forgószűrővel végezzük. Szűrés előtt különlegesen előkezelt kalcium-szulfátból segédréteget alakítunk ki a szűrő felületén. 7.104 Pa értékre csökkentett nyomás esetén a szűrő teljesítménye elérheti a 250 1/m2 .ó értéket. 100 liter tenyészléből (a bentonlt-szuszpenzióval együtt mintegy 115 liter folyadékból) 93—98 liter szűrlet kerül elválasztásra, a szűrlet a kiindulási aktivitás 5-10%át tartalmazna. A leszűrt szilárdanyag súlya 12—14 kg, 58—65% maradék víztartalom mellett. 110-115 liter szuszpenzió szűréséhez 2,0-2,5 kg szűrési segédanyagot használunk fel. Az elválasztott, nedves szilárd anyagot azonnal szárítjuk. A szárítást áramló meleg levegőben úgy végezzük, hegy a termék hőmérséklete nem haladja meg a 70 °C-ot. 12-14 kg nedves termékből 4,5-5,0 kg szárított terméket nyerünk, amelynek szárazanyagra vonatkoztatott hatóanyagtartalma 75-85 g/kg (a ható9
